RP-HPLC法测定人血浆中头孢拉定浓度.doc

RP-HPLC法测定人血浆中头孢拉定浓度[摘要] 目的：建立测定血浆中头孢拉定浓度的高效液相色谱法。方法：色谱柱为DiamonsilTM C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.05 mol/L KH2PO4-乙腈（85∶15）；柱温：35℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：262 nm；进样量：20 μl。结果：头孢拉定在0.5~40.0 μg/ml范围内有良好的线性关系，r=0.999 9；血浆中药物最低检测浓度为0.25 μg/ml（S/N=3）；提取回收率为75%；血浆中三种浓度回收率分别为(106.0±6.3)%、(103.0±4.6)%、(97.5±1.2)%，日内、日间RSD分别为4.9%、2.6%、1.0%及7.9%、3.2%、1.9%。结论：本法操作简单、快捷、专属性强，方法灵敏度和准确度均较高，适用于头孢拉定血药浓度及生物利用度的测定。 [关键词] 头孢拉定；高效液相色谱；血药浓度 [中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）02（a）-030-02 头孢拉定是第一代头孢菌素类抗生素，是目前临床上用来治疗呼吸道、泌尿道和皮肤软组织等轻、中度感染的常用药物之一。 目前头孢拉定在国内应用广泛，对头孢拉定的研究很多。头孢拉定在组织体液中分布良好，它在心肌、子宫、肺、前列腺和骨组织中皆可获有效浓度。其中脑组织中药物浓度仅为同期血药浓度的5%~10%，脑脊液中浓度更低。血浆蛋白结合率为6%~10%。口服0.5 g后6 h累积排出给药量的90%以上。头孢拉定在体内很少代谢，丙磺舒可减少本品经肾排泄。口服本品后吸收迅速，空腹口服0.5 g，于给药1 h后可达血药峰浓度（Cmax=11~18mg/L），血消除半衰期(t1/2)约为1 h。本文建立了测定血浆中头孢拉定浓度的高效液相色谱法。本法操作简单、快捷、专属性强，方法灵敏度和准确度均较高，适用于头孢拉定血药浓度及生物利用度的测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器 高效液相色普仪：LC-9A泵（日本岛津公司）、SPD-6AV型紫外可见检测器（日本日立公司）、N3000色谱工作站（浙江大学）；XW-80型涡旋混合器（上海手术器械厂）；TGL-16G型离心沉淀器（上海安亨科学仪器厂）。 1.2 试药与试剂 头孢拉定对照品（含量：99.8%，湖南百草制药有限公司），头孢氨苄对照品（含量：99.8%，湖南百草制药有限公司），乙腈（天津市康科德科技有限公司），甲醇（天津市康科德科技有限公司），磷酸（天津市大茂化学试剂厂），高氯酸（天津市大茂化学试剂厂），空白血浆（沈阳军区总医院）。乙腈、甲醇为色谱纯，其余均为分析纯，水为重蒸水。 2 方法与结果 2.1 血浆样品的处理 取空白血浆500 μl，加入50 μg/ml的头孢氨苄50 μl，涡旋混合1 min，加入10%的高氯酸溶液100 μl作为沉淀剂，涡旋混合1 min，离心（10 000 r/min）3 min，取上清液20 μl进样。 2.2 色谱条件 Diamonsil ODS C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司产品）；流动相：0.05 mol/L KH2PO4缓冲盐-乙腈（85∶15，pH=3.7）；流速：1.0 μl/min；进样量：20 μl；柱温：35℃；检测波长：262 nm。空白样品添加头孢拉定对照品的色谱图图1表明，头孢拉定色谱峰tR为9.5 min。 2.3 标准溶液的配制 精密称取头孢拉定对照品125.00 mg置于250 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得0.50 μg/ml的标准储备液。精密吸取标准储备液一定量，稀释定容至7个50 ml量瓶中，配成浓度为5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、400.0 μg/ml标准溶液。 2.4 标准曲线的制备 取空白血浆500 μl，加入头孢拉定标准系列溶液50 μl，配制成相当于头孢拉定血浆浓度为 0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/ml的血浆样品，按“2.1”项下依法操作并进行色谱分析。以头孢拉定与内标物的峰面积比值为横坐标（X），头孢拉定浓度（Y）为纵坐标进行线性回归，得标准回归曲线方程Y=0.057 41+4.838X，r=0.999 9（n=5），线性范围为0.5~40.0 μg/ml。最低检测限为0.25 μg/ml（S/N=3）。 2.5 回收率试验 取空白血浆配制浓度为0.5、5.0、32.0 mg/ml头孢拉定血浆样品，按“2.1”项下的方法操作。结果见表1。 2.6 精密度考察 取