生化研究仪曲线监控防止酶活力假性减低.doc

生化研究仪曲线监控防止酶活力假性减低[摘要]目的：探讨自动生化分析仪对一步法测定丙氨酸转移酶（ALT）过低检测值的曲线监控，避免高活力丙氨酸转移酶的漏检。方法：选择本地区正常体检人员4 792例，作丙氨酸转移酶活性测定，筛检出ALT＜8 μ/L者9例，同时对临床标本ALT＜8 μ/L者92例进行曲线监控，曲线异常标本作机外稀释后再测。结果：体检标本曲线缓慢下降，稀释后活力不高，临床标本92例中13例曲线异常占14%，稀释后活性增高＞1 700 μ/L。结论：本地区正常人群ALT＜8 μ/L少见，出现ALT＜8 μ/L且曲线异常的检测结果，可能为高活性标本，有必要将标本稀释后上机再测。 [关键词]自动生化分析仪；曲线监控；酶活力 [中图分类号]R446 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2007）07（c）-125-01 丙氨酸转移酶（ALT）速率法检测是各级医院实验室广泛应用的方法，较之赖氏法速度快，线性范围宽。但在日常工作中用自动生化分析仪一步法测定时，酶活力过高，大于1 700 μ/L时，有时可出现过低的检测值且不易被发现，本文对酶过低测值的样本进行曲线监控，发现曲线异常，将样本稀释后测定，取得较好的检测结果，现报道如下： 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 仪器与试剂美国魅力1800型全自动生化分析仪。丙氨酸氨基转移酶试剂，通用干粉型，中生公司生产，批号070481，复溶后1 h上机。 1.1.2 标本健康体检者，早晨空腹负压管采血3 ml，分离血清。临床血清标本。 1.2方法 将试剂根据说明书溶解，仪器参数设置：样品体积50 μl，试剂体积500 μl，第一波长340 nm，第二波长405 nm，孵育时间60 s，孵育温度37℃，低浓度7，高浓度600，因数1 746。 将本地区健康体检者包括幼儿园3～6岁儿童766例，中考、高考学生2 358例，企事业单位职工、离退休人员1 696例，剔除近期用药者、饮酒者、有不适症状者28例，共4792例做ALT测定。筛检出＜8 U/L者，监控反应曲线，再将其做5倍、10倍蒸馏水机外稀释后上机。 将临床标本ALT测值8 U/L者92例，实时监控反应曲线，将标本做5倍、10倍蒸馏水机外稀释后再测。 2 结果 体检者中ALT在8～40 U/L之间者4 677例，＞40 U/L者106例，8 U/L者仅9例，监控9例8 U/L者的反应曲线，均呈缓慢下降型，机外稀释后再测，酶活力不升高。临床标本ALT8 U/L者92例，稀释后ALT活性异常增高＞1 700 U/L，且有临床症状或伴有总胆红素升高者13例，反应曲线全部异常，曲线在延滞时间内从高吸收峰骤降至低吸收峰，在测定时间内曲线呈双向多峰型。79例稀释后不增高，稀释前后的反应曲线，从延滞时间到测量时间结束均为低峰平缓型下降。 3 讨论 单试剂速率法测定ALT的活性，是基层医院广泛使用的方法，连续测定（每15～60 s监测一次）反应过程中某一反应物或底物的吸光度随时间的变化，从而求出待测物的活性或浓度，将多点测定结果连接成线，可自动选择线性反应期来计算酶活力及浓度，结果较为准确，但是酶促反应要符合两个原则，即①在零级反应期测定，使U=Vm=常数，底物减少量或底物生成量与反应时间成正比；②反应速度与酶量呈线性关系[1]。在酶活力测定中，样品体积分数直接决定酶活力计算F值的大小，所以应根据厂家给出的样品体积分数比值来设定，不可以轻易改变。在自动分析中，应对反应线性实时监测，如果在监测时间内发现非线性，仪器会报警以防来自试剂、样品或仪器各方面因素造成的不可靠结果混入正式报告中。 根据酶速率法检测丙ALT的原理，L-丙氨酸＋α-酮戊二酸→丙酮酸＋L-谷氨酸，丙酮酸＋NADH＋H＋→L-乳酸＋NAD＋+H2O，NADH的氧化速率与标本中酶活性成正比，在340 nm波长处NADH呈特征性吸收峰，监测吸光度的下降速率，计算ALT的活性单位[2]，但血清标本中存在的α-酮酸（如丙酮酸）能消耗NADH；血清标本中谷氨酸脱氢酶增高时，有氨存在的条件下也能消耗NADH，因此在酶速率法检测时设置延滞时间，使上述副反应在正常延滞期内完成反应，但是，当标本中酶活性异常高时，一般在1700 U/L以上，在延滞时间内已呈底物耗尽状态，此状态并不是反应液中底物已被用完，而是因为酶促反应是双相可逆的，即使反应达到平衡，也会有不同比例的底物保留在反应液中，一般在酶催化反应初速度测定物中，底物都是处于过剩状态，但日常标本中免不了会遇到酶活力异常增高的标本，即使在仪器上设置线性核查，反应限核查也有少数高活性标本产生伪低，混入正常报告中去[3]，目前中小型医院，使用的