组织培养课件-花药与花粉培养-6.pptVIP

第七章 花药培养和花粉培养;1.名词 植物的花粉是花粉母细胞经减数分裂形成的，其染色体数目只有体细胞的一半，叫做单倍体细胞(haploid cell)。 花粉和花药的培养(pollen and anther culture)是指花粉在培养基上改变其正常发育和机能，不经受精而发生细胞分裂，由单个花粉粒发育成完整植株的技术。 用离体培养花药的方法使花粉发育成一个完整的植株，叫做单倍体植物(haplobiont)。;2、花粉和花药培意义;3、花药培养简史;4.花药培养与单倍体育种 花药培养的主要目的，是培育花粉粒的单倍体植株，并使单倍体加倍，作为育种材料的来源。 利用杂种花药离体培养获得的再生植株，由不同基因型的配子发育而来，具有丰富的变异类型，选择出有利的变异类型，经过经济性状鉴定后，选出优良者直接用于生产或配制杂交组合，获得优良杂交种子。 构建永久性分离群体－双单倍体系（Doubled haploid)，用于基因定位。;大大缩短育种周期。; 5. 花药培养技术 确定取材时间 选择大致处于所需要时期的花蕾。由于花粉发育时期和植株的某些外部形态特征之间的大致相关性，因此利用这些外部标志，选择符合条件的花蕾，经镜检确定花粉发育的准确时期。 在水稻中，以单核靠边期的花粉对诱导单倍体植株较为适宜，在外部形态上可根据叶枕距为5-15cm，颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片长度的1/2这些条件鉴定。;水稻花药培养;选取主穗（一级侧枝）的花蕾，因为一级侧枝的花蕾发育良好，数量大，发育同步。 操作过程中不应使花药受到损伤，若受损伤，则应淘汰，因为损伤常常会刺激花粉壁形成二倍体的愈伤组织。;花药培养的条件： 光照(12~18h，5,000~10,000 lx，28℃) 黑暗(12-16h，22℃)周期交替进行。;6、影响花药诱导频率的因素 6.1 花粉发育时期是影响培养效果的重要因素。 在诱导花粉进行雄性发育(指小孢子沿孢子体途径发育成花粉植株)过程中，不同物种花粉最适的发育时期不同，对多数植物来说，单核中期或晚期的花粉最容易形成花粉胚或花粉愈伤组织。 如南洋金花、烟草和芍药中的最适时期是第一次有丝分裂时期或稍前后，禾本科植物在单核早期(大麦)或单核中期(玉米、小麦)反应最好，番茄在减数分裂中期时更适宜。; 6.2 花药供体植株的生长条件对花药培养反应的影响是很大的。 水稻、小麦、大麦等禾本科植物，主茎穗比分蘖穗花药愈伤组织的诱导率明显地提高。同步化程度高。;6.3 培养基是花药培养中影响花粉启动和再分化的重要条件。 我国科学工作者对水稻、小麦的花药培养基做了改进，研制出N6培养基。在N6培养基上，水稻花粉的出愈率大幅度提高。 N6培养基的特点是铵离子浓度较低。 随后，进一步降低铵盐和硝酸盐浓度，同时附加生物素，研制出C17和W14培养基，它们可以大幅度提高小麦的花药出愈率。 马铃薯提取液为基本成分的马铃薯培养液，现在被广泛地应用于小麦花药培养，效果良好。 ;培养基中的植物生长物质的种类会影响 花粉发育的途径;培养基中糖的种类 对花粉胚的诱导和分化有显著影响。;在培养基中加入活性炭能促进花药培养 6.4 低温预处理可以提高花粉胚的诱导频率 以1-5℃预低温处理小麦幼穗，能提高花粉愈伤组织的产量。在4℃下冷冻石刁柏花蕾，预处理4天、8天和12天，愈伤组织诱导率比室温对照分别提高2.4倍、1.9和1.5倍。 各种植物要求预处理的温度和时间不同。;培养温度是影响花药反应的一个重要因素。 小麦要求???高温培养64天之后，再转入28-30℃下培养。一直高温培养效果并不好。 较高的温度虽能诱导较高频率的花粉愈伤组织，但愈伤组织分化白化苗的频率也高。控制培养温度仍是减少白化苗的一个有效措施。;7 图示花药培养过程;3-2、花粉培养;单倍体植株的二倍化 花粉植株染色体可自发加倍； 人工措施染色体加倍。;花药培养脱毒;思考题