形态水平试验.PPTVIP

植物生物学实验 叶绿体色素的提取及理化性质的鉴定 目的要求 了解叶绿素的分子结构、  理化性质和生物学功能。 学习提取叶绿素和分析其 理化性质的基本方法。 实验原理 试剂和器材 材料：菠菜叶片。 试剂：碳酸钙、丙酮、甲醇、  醋酸酮、氢氧化钾、乙 醚、盐酸。 器材：研钵、移液管、吸球、 天平、分液漏斗、量 筒、试管。 操作方法 1.叶绿素的提取取菠菜叶2g，放在研钵中，加石英砂和碳酸钙少许，丙酮5ml，研磨成匀浆，再加丙酮15ml，则得深绿色提取液，用漏斗过滤，即为色素提取液。 2.叶绿素的荧光现象取上述色素丙酮提取液少许于试管中，用反射光和透射光观察提取液的颜色有无不同，反射光观察到的溶液颜色，即为叶绿素产生的荧光颜色。 3.光对叶绿素的破坏作用 取上述色素丙酮提取液少许，分装于2支试管中，1支试管放在黑暗处（或用黑纸包裹），另1支试管放在强光下（太阳光下），经1-2h后，观察两支试管中溶液的颜色有何变化。 思考题 1.铜在叶绿素分子中替代镁的 作用，有何实际意义？ 2.为什么叶绿素在透射光下和 反射光下呈现不同的颜色？ * *  叶绿素具有光学活性,它吸收光量子 而转变成激发态叶绿分子，很不稳定， 当它回到基态时可发射出红光量子， 因而产生荧光。 叶绿素易受强光破坏，叶绿素中的Mg2+  可被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素， 再遇Cu2+则成为绿色的铜代叶绿素。 叶绿素是一种双羧酸的酯类，可与碱 起皂化作用，形成的盐能溶于水， 因而可与类胡萝卜素分开。 4.H+和Cu2+对叶绿色分子中Mg2+的 取代作用取上述色素丙酮提取液少许于试管中，一滴一滴加入浓盐酸，直至溶液出现褐绿色，此时叶绿素分子已遭破坏，形成去镁叶绿素。然后加醋酸铜晶体1小块，慢慢加热溶解，则又产生鲜亮的绿色，即形成了铜 代叶绿素。 5.叶绿素与类胡萝卜素分离取上述色素丙酮提取液10ml，加到盛有20ml乙醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿漏斗边缘加入30ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静置片刻，溶液即分为两层。色素已全部转入上层乙醚中，弃去下层丙酮和水，再用蒸馏水冲洗乙醚溶液1- 2次。 然后于色素乙醚溶液中加入5ml 30% KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静置约10min，再加蒸馏水约10ml，摇动后静置分离，则得到黄色素层和绿色素层，分别保存于试管中。