无血清饥饿法去除神经组织培养中的成纤维细胞-首都医科大学学报.PDF

2004 年 　6 月 首 都 医 科 大 学 学 报 J un . 2004 第 25 卷 　第 2 期 Journal of Capit al U niver sity of Medical Sciences Vol . 25 　No . 2 无血清饥饿法去除神经 组织培养中的成纤维细胞 北京市神经外科研究所 　历俊华 　万 　虹 　翟 　晶　王忠诚 提要 : 介绍去血清饥饿培养方法去除神经组织培养中的成纤维细胞 。取 2 日龄大鼠双侧坐骨神经和双侧嗅球 , ( ) 酶消化 、离心 ,10 %胎牛血清 FCS DM EM 体外培养 ,如果成纤维细胞生长迅速 ,换无血清 DM EM 培养液培养 。根据 细胞生长状况可反复上述过程 。S100 免疫荧光染色鉴定雪旺细胞和嗅鞘细胞纯度 。结果 :换无血清培养液后 ,成纤 维细胞迅速死亡 ,S100 免疫荧光染色雪旺细胞和嗅鞘细胞的纯度可达 98 %～99 % 。此方法简捷 、易操作 ,为神经组 织培养中去成纤维细胞的一种好方法 。 关键词 : 成纤维细胞 ; 无血清培养 ; 免疫荧光染色 中图分类号 : R 329 . 2 　　细胞移植治疗中枢神经系统损伤已经受到 min ,5 min 。去上清 ,将沉淀悬浮于含 10 %FCS 越来越多的神经科医师的重视[ 1 ] ,在体外培养 的 DM EM 培 养 液 中。雪 旺细 胞 中加 入 2 μ 中如何去除成纤维细胞以获得高纯度的目的细 mol/ L for skolin ,铺于涂有多聚赖氨酸的培养 胞一直是人们探索的重点 。本实验室在多年的 皿中。5 %CO2 ,37 ℃培养 。如果成纤维细胞生 ( ) 细胞培养中不断探索这一问题 ,积累了丰富经 长迅速 ,近融合时 3～5 d 改为无血清 DM EM ( ) 验 。现介绍一种去除神经组织培养中的成纤维 培养液 ,直至成纤维细胞脱落 5～7 d ,再换回 细胞的方法 ———无血清饥饿法 。 10 %FCS DM EM 培养基 。根据细胞的生长状 况 ,可反复上述过程 。 1 　材料和方法 1. 3 　免疫荧光细胞染色 雪旺细胞和嗅鞘细胞用 PB S 冲洗 ,4 %多 1. 1 　主要试剂 、仪器与动物 聚甲醛室温下固定 30 min ,正常羊血清室温孵 ( ) ( ) 育 1 h , 加抗 S100 抗体 1 ∶100 , 4 ℃过夜 。 L15 平衡液 GIBCO 公司 ,DM EM 培养 ( ) ( PB S 冲洗 ,加 F I TC 标记的羊抗兔 Ig G , 室温 , 液 Hy