TEGDMA抑制牙髓细胞矿化的研究(译文).docVIP

TEGDMA抑制牙髓细胞矿化的研究 K.M. Galler, H. Schweikl, K.-A. Hiller, A.C. Cavender, C. Bolay, R.N. D’Souza, and G. Schmalz 译自：Journal of Dental Research, 201; 90(2):257-262. 摘要 曾有学者建议将牙本质粘结剂应用于直接盖髓，但是一些体内研究表明此方法缺乏修复性牙本质的形成。本研究的目的在于研究一种常用的牙本质粘结剂——三乙二醇二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)，看其对于矿化具有潜在的抑制作用。实验中将人的牙髓细胞不同浓度的TEGDMA，随后分析矿化相关基因胶原I、碱性磷酸酶、骨涎蛋白、骨钙蛋白、Runx2和和牙本质涎磷酸蛋白的表达。通过RT-PCR进行的基因表达研究显示，随浓度和时间变化矿化标记物随之减少。亚中毒性浓度(0.3mM)的TEGDMA在4小时后和12小时后分别降低了5%~20%和50%的表达水平。同时，在应用TEGDMA处理牙髓细胞超过14天后，其碱性磷酸酶活性和钙沉积也显著降低。这些结果表明，哪怕是很低浓度的TEGDMA也会抑制牙髓细胞诱导的矿化，从而可以认为在应用此类牙本质粘结剂进行盖髓后会抑制修复性牙本质的形成。 关键词 三乙二醇二甲基丙烯酸酯(triethylene glycol dimethacrylate, TEGDMA), 牙髓细胞(dental pulp cells), 矿化(mineralization). 背景介绍 学界曾针对直接盖髓剂进行了广泛的研究，发现几种不同的制剂都会引起硬组织的形成。基于氢氧化钙(Ca(OH)2)的制剂的应用最为广泛，因为它对硬组织再生具有良好的效果。它可以实现牙髓活性的保存，并形成修复性牙本质，使得软组织被隔离，从而取得治疗的成功。 随着牙本质粘结剂与复合树脂的广泛应用，有学者认为牙齿粘接剂可以作为含Ca(OH)2制剂的替代品用于盖髓。虽然在猴子身上进行的实验中几乎没有炎症并伴有牙本质桥的形成，但对许多其他动物和人类进行的实验却表明在应用不同的粘结剂盖髓后无法形成硬组织；而在含Ca(OH)2的对照组却发现了牙本质桥的形成。对于这两种治疗方法均有报道证实发生了不同程度的炎性反应，但牙髓活性和成牙本质细胞功能均完好无损。这些结果表明粘接剂系统会干扰修复性牙本质的形成，因此并不如盖髓剂那样更容易被大家接受。 虽然关于牙本质粘结剂的生物相容性有大量的研究，但我们对于其内在的机制却缺乏了解。由于它们的有机质包含细胞毒性化合物即丙烯酸单体，如三乙二醇二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)或2-甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)，因此甚至在聚合反应后，从树脂基的材料中仍会释放出足量的残余单体，从而损伤其下方的细胞群。虽然剩余的牙本质层会减少不良的生物学效应，但经测量有效浓度为0.2~3.6mM的单体就会对牙髓产生作用，即便有完整的牙本质障层存在。 TEGDMA是一种细胞毒性单体，即便是亚致死量的TEGDMA也会损伤细胞的功能，改变其动态平衡、组织修复和矿化的调节通路。临床研究和最近的人类牙髓细胞应激反应研究表明粘结剂对于修复性牙本质的形成有干扰。本研究主要应用人类原代牙髓细胞来验证较低浓度的TEGDMA是否会降低矿化相关基因的表达，从而减弱矿物质的沉积。 材料和方法 细胞培养和TEGDMA 如前所述，人原代牙髓细胞培养取自新拔除的人类第三磨牙，依据雷根斯堡大学学术委员会批准通过的准许协议进行。将来自4颗智牙的细胞共同混合，培养于补加10%胎牛血清(FBS)、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素(Gibco, Invitrogen Corporation, Karsruhe, Germany)的αMEM中，用第3代的细胞评估TEGDMA作用后的细胞活性和增殖性、基因表达水平、ALP活性和钙沉积。为了检验这些可观察到的效果是否为细胞特异性的，我们进一步评价了牙髓干细胞(DPSC)的ALP活性和钙沉积，它常表现为高矿化活性，并已证实在体外可形成矿化结节。DPSC置于补加15%胎牛血清(FBS)、50μg/mL L-抗坏血酸-2-磷酸盐、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的αMEM中培养。 基于较前进行的人类原代牙髓细胞研究选择TEGDMA的浓度，在1M的DMSO中制备TEGDMA储存液(Sigma Aldrich, Taufkirchen, Germany)，在细胞培养基中稀释溶液以达到最终浓度为0.3mM, 1.0mM和3.0mM。 在6孔板上按每孔5×104个来接种细胞，以便于RT-PCR和茜素红染色观察钙沉积。采用碱性磷酸酶试验分析细胞活性和增殖性，将细胞按每孔2×103个接种于96孔板上来定量钙沉积。 细胞活力和增殖性 在不同浓度的