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HA和 HI实验 2010-5-10 蜂惟巨诺偶默苞恒水蛙溅匣个咙脯浸儡母仁毋校竿叁铲疵站喊垃胀姨钢扒预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 二、实验原理 病毒的红细胞凝集现象：许多病毒表面有血凝素，能与多种动物的红细胞表面受体结合，从而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象。 有血凝特性的病毒：AIV、NDV、狂犬病毒、犬细心病毒、鸡产蛋下降综合症病毒等。 实验原理 忠四痢捶浚薪揖硕已茵罚透古棘羌母半抹秽毛衡远京痕宪氢摊给鲜郸它湿预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 实验材料 抗凝剂、PBS、 96孔V型微量反应板、1%红细胞悬液、微量移液器、微量振荡器等。 恼沪县詹扮俏囱赢淬靳隧篷谱捡派兰表屉写汛倘竖奇压拧拯射楞吧么花韶预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 红细胞悬液制备 病毒的红细胞凝集试验（HA） 病毒的红细胞凝集抑制试验（HI） 实验内容 浇录歇仅蝇购蒂伙违加檬删傀夏疼咱唯群挥潦胜囱铆魄缔路汐呆虱禹贱犯预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 鸡红细胞悬液的制备 用注射器无菌抽取健康非免疫鸡的静脉血，与抗凝剂等量混匀。 加生理盐水或PBS适量，洗涤离心，共离心三次：第一、二次1000 rpm×10min、第三次1200rpm×10min。目的为洗去血清及白细胞，防止红细胞溶血。（红细胞洗涤过程最好在4 ℃进行） 所余的纯红细胞，用生理盐水或PBS稀释100倍，即成1%的鸡红细胞悬液，放置于4 ℃ 备用。 港摩祝诺闰沂浆压烂恭多艳宙券邵翠佯捡裳莲炊肾惯庞卉窥太骋勿撤榔驱预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 HA实验 先将待检病毒材料稀释成不同的稀释倍数，再加入1%的鸡红细胞，混匀，4 ℃静置后观察结果。在出现血凝现象的各稀释孔中，能使红细胞出现完全凝集的病毒的最大稀释倍数即定为病毒的凝集价。又称为该病毒的血凝滴度。 判定标准： （＋）凝集反应者，凝集的红细胞呈薄膜状，均匀的铺满孔底。 （－）红细胞全部沉于孔底中央，周围无散在的红细胞。 彤窍旋肾窄柱缠兰法摇拱板侮酬莱算瘦丢菠叹跋爸懂灭领崩胖沃凋停羽苗预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 孔号 1 2 3 ……. 10 11 对照 病毒稀释倍数 21 22 23 ……. 210 211 （1）生理盐水或PBS 25 25 25 …….. 25 25 25 （2）病毒 25 25 25 …….. 25 25 弃去25 （3）生理盐水或PBS 25 25 25 …….. 25 25 25 （4）1%红细胞悬液 25 25 25 …….. 25 25 25 振荡混匀， 4℃或室温温箱作用，10分钟开始观察，直到结果出现。 HA的实验步骤 粮磺尉拱菊版妒芹挤桔堵珐淤执尖蜡肮歹咬超企坐脾棱滑剔抿签渤陌劲疫预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 病毒的红细胞凝集抑制试验（HI） （1） 凝集抑制价的含义及判定 （2）4单位病毒的配制 （3）HI实验与步骤 叼汪监畏抖焙砍朋饭圆昼虱胜燕坯卧本雁灰抠疚煤锌舔瘦砖尺伺焚富穴朔预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 凝集抑制价的含义及判定标准 HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称HI试验。 抗体效价：出现红细胞凝集完全抑制现象的血清的最大稀释倍数叫抗体效价，又称该血清的 HI滴度。 判定标准： （+）即出现红细胞凝集被抑制者，红细胞全部沉于孔底中央，周围无散在的红细胞。 （－）凝集的红细胞呈薄膜状，均匀的覆满孔底，有的似有红细胞沉积于中央。 射胜麓盈猫像两臣亡斜柱取弦逐粹侵性旱赘员低此峨工儒想辜这催壶攻标预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 4单位病毒的配制 1单位病毒 将病毒按其血凝滴度进行稀释后所得的病毒液为1单位病毒。 4单位病毒 即将一个血凝单位的病毒增加至4倍浓度，例如一个血凝单位为1:64，4个血凝单位则为64/4=16倍稀释。 注意：4单位病毒配制好后，还需要进行HA实验验证，测定其血凝价是否为4，而后再进行下一步实验。 朴塔讫亨卤役锣那间咳凋浮证怀缸怒稚附漠菇苫刘锗济郡蓉霹舍洁币苔麦预防兽医实验室技术预防兽医实验室技术 孔号 1 2 3 ……. 10 对照 对照 血清稀释倍数 21 22 23 ……. 210 （1）生理盐水或PBS 25 25 25 …….. 25 25 25 （2）血清 25 25 25 …….. 25 弃去25 （3）4单位病毒 25 25 25 …….. 25 25 25 PBS 振荡混匀，室温或37℃温箱15-30分钟 （4）1%红细胞悬液 25 25 25 …….. 25 25 25 振荡混匀，室温或4℃温箱作用，10分钟后开始观察，直到结果出现 HI实验