利用日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3检测血吸虫抗原和抗体的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的：制备日本血吸虫（中国大陆株）重组信号蛋白 14-3-3 （rSj14-3-3 ），并制 备抗rSj14-3-3 蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体，探讨纯化的rSj14-3-3 蛋白及其 相应的单克隆抗体和多克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。 方法：通过对含 有重组质粒pET28a-Sj14-3-3 的工程菌E.coli BL21 的诱导培养，制备rSj14-3-3 蛋 白，以蛋白纯化试剂盒（His-Bind Purification Kit ）予以纯化，获得高纯度的 rSj14-3-3 蛋白，以纯化后的rSj14-3-3 蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠，用杂交瘤技术 制备抗rSj14-3-3 蛋白的单克隆抗体并予以纯化。通过间接ELISA方法测定单克隆 抗体的效价，并用Western blotting鉴定单克隆抗体的特异性。同时，以纯化后的 rSj14-3-3 蛋白为抗原免疫家兔，制备抗rSj14-3-3 蛋白的抗血清并予以纯化，制 备相应的多克隆抗体，用间接ELISA 法测定多克隆抗体的效价。以纯化的 rSj14-3-3 抗原用间接ELISA法分