验方法.docxVIP

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  • 2017-09-08 发布于湖北
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蛋白酶活性检验方法1 定义1g固体酶粉(或1mL液体酶),在一定温度和PH值条件下,1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位,以(u/ mL)表示。2 福林法(第一法)2、1 原理蛋白酶在一珲的温度与PH条件下,水解底物,产生含有酚基的氨基酸(如:酪氨酸、色氨酸等),在碱性条件下,将福林试剂(Folin)还原,生成钼蓝与钨蓝,用分光度法测定,计算其酶活力。2、2 试剂和溶液2、2、1 福林试剂的制备于2000mL磨口回流装置中加入钨酸钠(Na2Wo4·2H2O)100g、钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g、水700mL、85%磷酸50mL、浓盐酸100mL,水火沸腾回流10h,取下回流冷却器,在通风橱中加入硫酸锂(Li2SO4)50g、水50mL和数滴浓溴水(99%),再微沸15min,以除去多余的溴(冷后人有绿色需再加溴水,再煮沸除去过量的溴),冷却,见水定溶至1000ml。混匀,过滤。制得的试剂应呈金黄色,贮存于棕色瓶内。使用溶液:一份福林试剂与二份水混合,摇匀。2、2、2 碳酸钠溶液c(Na2CO3)=0.4mol/L称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4g,用水溶解并定容至1000 mL。2、2、3 三氯乙酸c(CCl3·COOH)=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g,用水溶解并定容至1000 mL。2、2、4 氢氧化钠溶液c(NaOH)=0.5mol/L

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