第七章 分光光度法课件.ppt

第七章; 分光光度法是一种基于物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，是生命科学中最常用的分析技术之一。 包括： (1) 可见分光光度法 (2) 紫外-可见分光光度法(主要) (3) 红外光谱法等;特 点; 一般分光光度法的相对误差为2~5%，若使用精密仪器，相对误差可降至1~2%，其准确度虽不如滴定分析法及重量法，但对微量成分来说，还是比较满意的，因为在这种情况下，滴定分析法和重量法准确度更差，甚至无法进行测定。 ;(三)操作简便，测定速度快;物质对光的选择性吸收;一、光的基本性质;2. 单色光和复合光;3. 电磁波谱;4. 可见光和互补光;图10-1 光的互补色示意图(?/nm);二、物质对光的选择性吸收;(一)物质对光产生选择性吸收的原因; 在可见光区，不同波长的光具有不同的颜色。当一束阳光(白光)通过棱镜后就色散成红、橙、黄、绿……等颜色的光，这些光具有不同的波长。 所以不同颜色光，其波长不同，物质的颜色正是由于他们对不同波长的光具有选择性吸收而产生的。 当一束白光通过某一物质或溶液时，由于物质对光的选择性吸收，某些波长的光被吸收，另一些波长的光则不被吸收而透过溶液。;溶液的颜色由透过光的波长所决定;例 如：CuSO4溶液;1. 用不同波长(400-720nm)的光，照射某一吸光物质的溶液； 2. 测吸光度(A) 3. 以?—A作图，得一曲线 直观地表示出物质对光的吸收特征。;图10-2 KMnO4溶液的吸收曲线;结 论;第二节;一、朗伯-比耳定律; 当一束平行单色光照射到任何均匀、非散射的介质(固体、液体或气体)。 例如：溶液时，光的一部分被介质吸收，一部分透过溶液、一部分被器皿的表面反射。则它们之间的关系为：;近似处理;推 导;实验证明; 1760年由朗伯推导出了吸光度于吸收介质厚度的关系式：;2.比耳定律;3.朗伯-比耳定律;4.朗伯-比耳定律物理意义;5.朗伯-比耳定律成立的前提;6.吸光度的加和性;(二)吸收系数和桑德尔灵敏度; 当c：g.L-1 b：cm时 K用a表示，称为吸收系数， 其单位为L.g-1.cm-1 ， 这时朗伯-比耳定律变为： A＝abc;(2) 摩尔吸收系数(?) ;摩尔吸收系数(?)的物理意义;摩尔吸收系数(?)的性质;;;(3) 吸收系数(a)与摩尔吸收系数(?) 的关系;2. 桑德尔灵敏度(Sandell) S;3.桑德尔灵敏度(S)与摩尔吸收系数(?)的关系;S 单位：?g·cm-2;例 题：;解：;(三)标准曲线的绘制及应用;2. 标准曲线的应用;二、引起偏离朗伯-比耳定律的原因;(一) 物理因素;2.非平行入射光引起的偏离;3．介质不均匀引起的偏离;（二）化学因素;2. 化学反应引起的偏离;第三节;第四节;包 括：;一、显色反应及其条件的选择;1. 显色反应;选择显色剂和显色反应的一般标准 ;(1) 选择性要好;(2)灵敏度要高;(3)对比度要大;(4)有色化合物要稳定、组成要恒定;(5)显色反应的条件要易于控制;2. 显色剂;(1) 无机显色剂;(2) 有机显色剂;金属螯合物应用于光度分析的优点;4. 虽然大部分金属螯合物难溶于水，但可被萃取到有机溶剂中，大大发展了萃取光度法。 5. 在显色分子中，金属所占的比率很低，提高了测定的灵敏度。 因此，有机显色剂是光度分析中应用最多最广的显色剂，寻找高选择性、高灵敏度的有机显色剂，是光度分析发展和研究的重要内容。; 有机化合物为什么有颜色，主要由其结构决定，即其结构具有特殊的生色基团和助色基团。;生色团;助色团; 含有生色基团的有机化合物常常能与许多全属离子化合生成性质稳定且具有特征颜色的化合物，且灵敏度和选择性都很高，这就为用光度法测定这些离子提供了很好的条件。 有机显色剂的种类很多，常用的有： 1. 邻二氮菲 2. 双硫腙 3. 二甲酚橙 4. 偶氮胂III 5. 铬天青S;(二) 显色反应条件的选择;1.显色剂的用量;显色剂的用量的实验确定;试液吸光度与显色剂浓度的关系曲线;2.溶液的酸度;(1) 酸度对被测物质存在状态的影响;(2) 酸度对显色剂浓度和颜色的影响;例 如：; 对于某些逐级形成络合物的显色反应、在不同的酸度时，生成不同络合比的络合物。例如铁与水杨酸的络合反应，当 pH＜4 [Fe3+(C7H4O3)2-]+ (1:1) 紫色 4＜pH＜9 [Fe3+(C7H4O3)22-]