携带小反刍兽疫病毒H基因的重组山羊痘病毒构建和鉴定.PDFVIP

中国动物检疫 2011年第28卷第7期 一33一 蜒姆 主持人：胡藕祥 gdwjy@in．。m 携带小反刍兽疫病毒H基因的 重组山羊痘病毒构建和鉴定 南文金 ，王清华 ，赵永刚、，吴晓东 ’，包静月 ’，王志亮 ’ (1．中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心，山东青岛 266032； 2．韶关学院英东动物疫病研究所，广东韶关 512005) 摘 要：将小反刍兽疫病(PPRV)毒糖蛋 白基因H插入到山羊痘病(GPV)毒通用转移载体PtkPgpt．egfpP启动子P7．5的下 游，构建了重组山羊痘病毒转移载体PtkPgpt．egfpPpprv-H。该重组转移载体转染感染山羊痘病毒疫苗株的绵羊睾丸细胞中，通过 同源重组获得小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒，通过纯化和PCR鉴定，证明小反刍兽疫病毒H基因插入到山羊痘病毒基 因组中。本研究为进一步研究PPRVH基因重组山羊痘病毒的免疫原性奠定了基础。 关键词：小反刍兽疫病毒；H基因；山羊痘病毒 中图分类号：S852．659．5；0786 文献标识码：A 文章编号：1005944X(2011)07．0033．04 ConstructionandIdentificationofRecombinantG-oatpoxVirus CarryingPestedesPefi~ VirusH G锄e NanWenjin ，WangQinghua，ZhaoYonggang，WuXiaodong。，BaoJingyue，WangZhiliang (1．ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao，Shandong 266032； 2．InstituteofYingdongAnimalDisease，ShaoguanUniversity，Shaoguan，Guangdong 512005) AbsI弱IctlToconstructhterecombinantgoatpoxvirustransfervectorPtkPgpt-egfpPpprv-H，thePPRV—H genewasinsertednitothe downstream ofpromoter 7,5 ofGPV vector Pt]I(Pgpt_eg币P．The recombinantviruswasgenerated by rtansfection of PtkP印t．eg Ppprv—H intoLT cellthathadbeeninfectedwith goatpoxviursvaccniestrain．Rcombniantviruswassuccessfully obtaninednadidentifiedbyPCR．Th esutdyprovidedfoundationforfurthersutdyofimmunogeniciytofhterecombinnatgoatpox． Keywords,PestedesPetitsRuminants；H gene：Goatpoxvirus 小反刍兽疫 (PestedesPetitsRuminants，PPR) Nd,反刍兽疫流行病学调查。因此，研究一种安全、有 是由小反刍兽疫病毒 (PestedesPetitsRuminants 效的新型疫苗势在必行。 virus，PPRV)引起的小反刍动物 (特别是山羊和绵羊) 本研究克隆了小反刍兽疫病毒H基因，构建了 的烈性，接触性传染病。具有极高的发病率和死亡率， PPRV．H基因重组山羊痘病毒，为研究小反刍兽疫基 主要侵害淋 巴组织及消化道上皮组织，病症包括高 因工程疫苗奠定基础。 热、大量的眼鼻分泌物、流涎、坏死性 口炎、胃肠炎及 1 材料和方法 支气管肺炎，解剖时在大肠可见特异性斑马条痕[1-21。 1．1 材料 PPR_V是副黏病毒科 (Paramyxoviridae)麻疹病毒