卵巢癌相关抗CA125胶体金免疫层析检测方法的初步建立.pdf

ofov撕ancancer Initialesta．blislullent 1 associatedCA25colloidal a【1tigen gold memod iIImmochromato粤’印hic to ADissertationSubmitted HenanNomal theGraduateSchoolof UniVersity iIlPaItialFulfillmentofthe Requirements forme of Degree MasterofScience By C兹e刀I锄口刀，z口，z Yunlong SupeⅣisor：Prof．Wang 2015 May ㈣删舢删㈣㈣删 Y28601 74 摘要 卵巢癌是女性生殖器最常见的三大恶性肿瘤之一，因其发病初期无典型临床症状， 多数患者就诊时已处于患病晚期。因此，如何在卵巢癌发病早期准确诊断就显得尤为重 的血清型肿瘤标志物，对上皮性卵巢癌具有一定的特异性和敏感性，在卵巢癌的预防、 辅助诊断、病情评估以及术后疗效等方面具有非常积极的意义，可作为卵巢癌防治的主 要监测指标。目前CAl25的检测技术主要有化学发光法及酶联免疫法等，所使用的检 测试剂盒大多为昂贵的进口或国内分装试剂，且检测时均需依赖相关检测仪器在实验室 进行，检测成本较高，不适合于基层医院进行大规模初筛和床旁快检。因此，急需寻找 一种简便、快速的检测技术，为临床诊断提供依据。 本研究采用正辛酸．硫酸铵沉淀法纯化CAl25包被和标记单克隆抗体，经透析后用 紫外分光光度计测定280Ilm处吸光值，根据经验公式计算出两种抗体的蛋白浓度，再通 过SDS．PAGE对两株抗体进行纯度鉴定。采用柠檬酸三钠还原法并控制柠檬酸三钠加入 量的不同而制备不同粒径的胶体金，对其最适粒径、胶体金制备工艺、标记pH、最佳 标记蛋白量、金标稀释液加入量、硝酸纤维素膜、样品垫处理液、划膜液和最佳包被抗 体量等因素进行选择优化，并对试纸条的稳定性、特异性、灵敏度进行性能研究及实验 室临床标本评价，制备出能快速检测人血清中cAl25的胶体金检测试纸。 实验结果表明，纯化后获得的抗体纯度较高，其中每3mL抗体腹水纯化后获得lmL 24．5111ll胶体金颗粒相对均一，且性能稳定。胶体金制备的最优工艺为：加热至沸腾时间 金检测试纸条工艺：胶体金与蛋白标记pH为7．5，标记蛋白浓度为1．4m咖L，金标稀 NC膜，样品垫处理液最佳配方组合为O．03M 释液加入量为300肛UmL，NC膜选用TEST pH8．8