基因重组菌高密度培养研究.pdfVIP

国外医药抗生素分册2003 年 9 月第 24 卷第 5 期 2·03 · ( ) 文章编号 :1001 - 8751 2003 05 - 0203 - 05 基因重组菌高密度培养研究 　叶 　勤 　 (华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 , 上海 200237) 　　摘要 : 　培养基因重组菌实现目标基因高表达 ,除了构建高表达重组菌 ,培养过程的工艺控制和反应器性能对 重组蛋白的表达水平也有重大的影响。本文介绍影响重组菌质粒稳定性和表达水平的因素 ,并给出一些高密度发 酵的实例。 关键词 : 　高密度培养 ; 　干扰素 ; 　心钠素 ; 　中性蛋白酶 中图分类号: 　Q939. 9 　　　　文献标识码 : 　A 　　随着基因重组技术的发展 ,越来越多的外源基因 希氏菌 DH5α(pBV220) 细胞密度的变化[1 ] ,可以看到高 在微生物中表达 ,为大量生产异种蛋白或改变微生物 密度培养未能实现外源基因的高表达 , 以单位菌体生 固有的代谢特性以提高初级或次级代谢产物的生产创 γ 产水平为基准比较时 , IFN 的生产水平大大下降。研 造了条件。重组蛋白的生产水平 ,不但取决于基因重 究基因重组菌发酵的规律 ,在此基础上进行高密度发 组菌的构建 ,发酵过程的工艺控制和发酵罐的性能与 酵 ,是提高目标蛋白生产水平的基本方法。 操作也有重大的影响。对于以重组基因编码的蛋白为 1 　质粒稳定性 目标产品的基因重组菌发酵过程,通常采用高密度发 质粒是导入外源基因最常用的载体。重组质粒往 酵的技术 , 以提高目标蛋白的生产水平,从而有利于产 ( ) 往因在生长过程中发生丢失 脱落性不稳定 或外源基 品的进一步分离纯化 ,并且相应地可以缩小发酵罐的 ( ) 因的突变 结构不稳定 而使重组菌失去生产重组蛋白 体积 ,减少投资 , 也便于实施基因重组菌的密封。但 的能力。对于具有脱落性不稳定的重组菌 , 由于丢失 是 ,随着发酵过程中细胞浓度的提高 ,外源基因产物的 重组质粒的细胞具有生长优势 , 因此在培养中的比例 水平并不一定能相应提高 ,甚至大大低于非高密度培 不断增大 ,从而严重影响重组蛋白的生产。重组质粒 ( γ) 养的结果。表 1 是人干扰素 IFN 表达水平随大肠埃 的稳定性一方面与重组质粒本身的结构、宿主菌的特 性等有关 ,也和基因重组菌的环境及细胞自身的生理 α( ) γ 表 1 　大肠埃希氏菌 DH5 pBV220 密度对 IFN 表达的影响 状态有关 ,因此通过发酵过程的调控 ,也可以使重组菌 菌体浓度 IFNγ IFNγ比活 的稳定性提高。培养基组成、限制性底物种类和浓度、