测定血清总蛋白和白血比.pptVIP

血清总蛋白和白/球比值测定;实验目的：;一、血清总蛋白的测定 ;生理盐水;实验步骤：;;2、血清总蛋白浓度降低 （1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。 （2）摄入不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质，慢性胃肠道疾病引起的消化吸收不良，患消耗性疾病等，均可造成血清蛋白浓度降低。 （3）合成障碍：主要见于肝脏患疾。血浆清蛋白及大部分球蛋白均由肝脏合成，肝功能严重损害时，血浆蛋白质的合成量减少，其中以清蛋白浓度降低最为明显。 （4）蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血。 ;1、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是配合铜离子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾是抗氧化剂，防止碱性酒石酸自动还原。 2、由于各种血清蛋白质的相对分子质量不同，古其浓度不宜用mol/L表示，而用g/L表示。 3、高脂、黄疸及溶血标本应做血清空白对照来校正误差。 4、本法绘制的标准曲线是一条通过原点的直线，在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。;; 溴甲酚绿储存液：BCG 419mg溶于10ml 0.1mol/L NaOH，加NaN3 100mg，定容至1L，储存于棕色瓶中备用。 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.2）：分别配制 0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，按体积比 12.3 : 7.7 混合。每1L混合液加入NaN3 100mg。 30%聚氧化乙烯月桂醚溶液：取Brij-35 30g，加少量水，60度水浴溶解加水至100ml。 BCG应用液：BCG储存液 250ml、0.1mol/L柠檬酸缓冲液(pH=4.2) 750ml、30% Brij-35混合而成。 标准蛋白溶液(10mg/ml)：称取人白蛋白 1.00g，用生理盐水溶解并定容至100ml。;实验步骤：; 混匀后以空白管校零，立即比色，比色波长为620nm,以吸光度为纵坐标，相应管中的白蛋白浓度为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 2、血清白蛋白的测定 用生理盐水按 1:10 的比例稀释血清，取稀释后的血清0.2ml，加入BCG应用液 5.0ml，混匀后立即同上比色，读取吸光度，并从标准曲线上查出相应的白蛋白浓度。 3、白蛋白与球蛋白的含量比(A/G) 用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度，用总蛋白浓度减去白蛋白浓度即得球蛋白浓度，并可求得白蛋白与球蛋白的含量比： 白蛋白与球蛋白含量比= ————————;;（1）BCG除与白蛋白结合外，还可与α球蛋白及β球蛋白结合，但与后者结合速度较慢，其显色强度分别为白蛋白的20%及10%，因此本方法操作中应控制比色时间，在BCG加入后30s内完成测定，避免球蛋白参与反应。 （2）BCG本身是一种pH指示剂，变色域为pH=3.8（显黄色）~5.4（显蓝绿色），因此控制反应液的pH值是本法测定的关键。;谢谢观赏！