肠道病毒标本的采集、运送、保存和实验室检测指南.docVIP

肠道病毒标本的采集、运送、保存和实验室检测指南 为及时、科学地采集和运送手足口病标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，特制定本指南。 一、采样液 1．pH7.4～7.6 HANK氏平衡盐（含0.5%的牛血清白蛋白）。 2．pH7.4～7.6的Eagle’s MEM培养液（含0.5%的牛血清白蛋白）。 二、标本种类及采集 1．咽拭子：用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的采样管中。 2．患者粪便：采集5～10g粪便置于15ml空采样管中。 3．血清标本：须采集急性期、恢复期双份血清。用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml无菌螺口塑料管中。 标本采集好后，应在采样管上做好标记，并注明标本的种类，同时及时填写采样表，要求信息完整。 三、 标本保存及运送 标本应在冷藏的条件下尽快进行送实验室检测，24小时内能检测的标本可置于4℃保存，24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存。如无－70℃保存条件，则于－20℃冰箱暂存。血清可在4℃存放3天、-20℃以下长期保存。标本运送期间应避免反复冻融。 四、标本的实验室检测 1．核酸检测：方法包括RT-PCR和Real-Time RT-PCR，首先使用肠道病毒通用引物进行快速筛查，得到阳性结果后使用EV71、CoxA16等引物和探针进行分型。 2．病毒分离及鉴定：采用RD、Hep2和Vero细胞进行病毒的分离，第一代7日内仍然为阴性的标本需继续盲传一代。病毒鉴定采用中和试验（NT）和间接免疫荧光法（IFA）。 3．血清学检测：采用组合血清进行血清中和试验，双份血清具4倍增长才具有诊断意义。 1