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毛细管电泳应用课件.ppt毛细管电泳应用课件.ppt
高效毛细管电泳的应用
1、毛细管电泳的定义
2、几种毛细管电泳的分离原理
3、毛细管电泳的基本配置
4、毛细管电泳的应用领域
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一、毛细管电泳的定义
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电泳:电解质中带电粒子在电场
作用下,以不同的速度向电荷相
反方向迁移的现象。
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传统电泳会在电解质离子流中产
生自热,引起径向粘度和速度的
梯度,从而导致区带展宽、降低
效率。
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毛细管电泳是在散热效率极高的、空
芯的、微小内径(10-200μm的毛细
管内进行的大、小分子高效分离技术。
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毛细管电泳的主要优点:
1、高灵敏度
2、高分辨
3、速度快
4、进样少
5、成本低
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高灵敏度:紫外检测器的检测极
限在10-13—10-15mol之间,荧光检
测可达10-19—10-21mol。
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高分辨:峰分离效率超过1百万理论塔
板数,一般可达几十万。
理论塔板数=5.54(tR/w1/2)2。
分离度=2(tR2-tR1)/w1+w2,一般要大
于1.5。
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高效毛细管电泳
普通色谱
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高效毛细管电泳
普通色谱
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速度快:许多分析在10分钟内完成。
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进样少:一般需要毫微升的进样量。
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成本低:一般只需要可长期使用
的毛细管和极微量的可自己配制
的缓冲液。
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毛细管电泳的分离原理:在自由
区带电泳(CZE)中,电泳的移
动(带电荷分子朝相反极性的电
极方向移动)和电渗流(在毛细
管内壁上的电荷和应用的势能而
引起的电解质流动)的结合导致
了分离。
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+
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+
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+
+
缓冲液
毛细管
缓冲液
+
-
+
-
++
高电压
检测器
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电渗流的大小取决于电场强度、电
解质的pH、缓冲液的组成和离子强
度、内磨擦和毛细管表面等特点。
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毛细管电泳的分类:
1、毛细管区带电泳(CZE)
2、分子体积排除(筛滤)电泳或
凝胶电泳(CGE)
3、等电聚焦电泳(IEF)
4、胶束电动力学电泳(MECC)
5、等速聚焦电泳(ITP)
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二、几种毛细管电泳的分离原理
(CZE、CGE、MECC、IEF、ITP)
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毛细管区带电泳(CZE)的分离
原理:
基于各被分离物质的净电荷与质
量之间比值的差异,不同离子按
照各自表面电荷密度的差异以不
同的速度在电解质中移动,而导
致分离。
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毛细管区带电泳分离中的有关因
素:
工作电压:分离
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