血片的制作和染色课件.pptVIP

血片制作和染色 李金凤 平乐县中医医院 人体疟原虫的基本结构 细胞浆 随虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。 核 鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。 人体疟原虫的基本结构 疟色素 不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈细小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。 设 备 载玻片 新玻片 把玻片浸入有液态洗涤剂清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再放入盛有清水的容器中换水3~4次，凉干，最后用干净柔软的棉巾将玻片擦亮。 用于特殊目的玻片，上述处理后将玻片浸在95％乙醇5~10分钟，再擦干擦亮。 设 备 旧玻片 将玻片浸泡于洗涤剂溶液中1~2天，或浸泡于煮沸的5％肥皂水1~2小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中1~2小时，擦去玻片上的血痕，用清水漂洗3~4次，再将玻片擦干擦亮。 玻片包装 洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。 设 备 采血针 使用一次性采血针。 玻片盒 为防止污染和苍蝇吸食血膜，新血片应放在玻片盒内，厚血膜要保持水平，直到充分干燥。 75％乙醇棉球 用于采血前后消毒。 记号笔 用于记录血片号码。 试 剂 染色液种类 以碱基美蓝液和酸性伊红液混合的多色性染剂（美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青）配制的多色性染液分为两类： 水溶液：罗氏（Romanowsky）染液、西氏（Simon)、J.S.B氏染液、费氏(Field)等； 醇溶液：吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液、利氏（Leishman）等。 试 剂 染色原理 伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质（如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等）可结合成不易溶于水的沉淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的阴离子，美兰与疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合染成兰色。 试 剂 吉氏（Giemsa’s）染液配制 吉氏粉 5.0 g 甲醇 250ml 甘油 250ml 将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至加完甘油倒入500ml有塞玻璃瓶。在研钵中加入少量甲醇洗掉剩余部分倒入瓶内，再加甲醇洗静研钵中甘油。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。 试 剂 瑞氏（Wright’s）染液配制 瑞氏染剂粉 1.0 g 甲醇 500ml 甘油 15ml 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用甲醇洗研钵中的甘油，溶液倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。 试 剂 染色用水 常用的染液稀释和冲洗用水是中性蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水。在没有蒸馏水时，也可用井水、河水、泉水或雨水。稀释和冲洗用水的pH值在7.0-7.2染色效果最佳。也可选用临时配制的PBS缓冲液，作为稀释和冲洗用水。 试 剂 PBS缓冲液配制（0.01 mol/l PBS pH7.2） KH2PO4 0.38g NaHPO4 1.02g(或Na2HPO4 ·12H2O 2.58g) NaCl 8.00g 蒸馏水加至 1 000ml 血片制作 取血时机 现症病人随时取血，疟疾普查不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，应掌握适宜的取血时机。 ●一般患者发作数小时至十小时内，可见环状体,12～36小时发育至滋养体，36 ～ 48小时可见裂殖体，发作二次可见配子体。 ●恶性疟原虫裂体生殖在内脏毛细血管内进行，发作前末稍血液中不易查到。较理想的取血时间是在发作后20小时左右，初发患者退热后常查不到原虫。 采血部位和方法 通常耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指