微生物培养基制备与环境和人体表面微生物观察有图版.docVIP

微生物培养基制备及环境和人体表面微生物观察 摘要 本次实验主要在于学习、熟悉、掌握微生物实验中的最根本的操作技术：学会并配制培养基，制作平板和斜面，学会使用高压蒸汽灭菌器，熟悉掌握对于无菌操作，棉塞制备，包扎技术等实用技能，为将来进一步的实验打下基础。 实验中，共制备10个平板，11个斜面，并在平板上接种环境与人体表面的微生物进行培养。不仅为了练习接种、观察等技术，更是为了培养对于无菌操作重要性的认识。平板的制备需要通过计算、称量、熔化、加琼脂、加塞、包扎、高温灭菌、倒平板等过程，斜面的制备中，额外的需要进行分装，搁置斜面的过程。这些过程中，我们需要严格控制培养基成分的剂量，及时控制pH值，更需要做到灭菌彻底，防止杂菌污染等要求。接种微生物时，要注意在酒精灯火焰旁进行，营造无菌环境，避免杂菌的污染。 实验中，我们也学会如何进行制作棉塞，增强实验室动手能力，为以后试验打下基础。 在观察实验结果中，菌落的生长还是比较理想的。除空白组，其他实验组中每块平板上，都有多种菌落存在，给观察带来一定的麻烦，但这也说明实验的过程还是较成功的。 关键词培养 培养基 无菌操作 菌落前言 在做微生物实验时，我们必须做到规范操作，而这就要求在初期接触微生物实验时多通过学习、练习，去熟悉各种技能与方法。本次实验是对微生物实验中基本技术的学习与掌握，这对以后的试验有重大影响，需要认真对待。 试验目的：1、学习、熟悉并掌握微生物实验中平板与斜面的制备过程；学习、熟悉并掌握微生物实验中的部分基础操作：棉塞的制作，牛皮纸包扎技术及高压蒸汽灭菌器的使用等； 3、体会无菌操作的重要性 4、观察环境及人体表面不同微生物菌落的形态特征，比较数量与类型。 试验原理：1、通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌在固体培养基上，经过生长繁殖形成了几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落（菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体）。通过观察菌落的形态特征进行比较。 2、 每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 3、 培养细菌一般用牛肉膏蛋白胨培养基，这是一种被广泛应用的天然培养基，其中牛肉膏提供碳源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。 4、 “无菌操作”是指在微生物操作中，除了使用的容器、用具和培养基必须进行严格的灭菌处理（这里采用高压蒸汽灭菌）外，还要通过一定的技术来保证目的微生物在转移过程中不被环境中的微生物污染。高温对微生物具有致死效应，因此在微生物的转接过程中，一般在火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，以达到灭菌的目的。 1.材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 溶液及试剂： 牛肉膏 、蛋白胨 、NaCl 、琼脂、1 mol/L NaOH溶液 、1 mol/L HCl溶液 1.1.2 仪器： 电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、称量纸、量筒、加热炉、PH试纸、高压蒸汽灭菌锅、棉花、纱布、牛皮纸、麻绳、试管（11支）、三角锥瓶、培养皿（5个）、酒精灯、灭菌棉签、恒温箱等。 1.1.3 微生物来源： 笔、眼镜、钱币、头发、手机 1.2 实验方法 1.2.1 计算与称量 配制培养基溶液200ml；配料：牛肉膏 0.6g, 蛋白胨 2.0g，NaCl 1.0 牛肉膏放在最后称取，并用量筒取水200ml。 1.2.2 熔化 将牛肉膏、蛋白胨、NaCl加入烧杯，并兑入少量足够的水，将烧杯置于加热炉上加 热，并不断搅拌，至全部溶解。 1.2.3 加琼脂 琼脂根据需要称取 4.0g，需要在牛肉膏等全部溶解后加入并搅拌溶解。 1.2.4调节PH 在琼脂溶解后，用玻璃棒蘸取溶液，滴于PH试纸上，与标准比色卡比较，利用NaOH 溶液和HCl溶液调节溶液PH至7.4～7.6左右。此次实验中，开始溶液PH偏小，在滴加10滴左右 NaOH溶液后，pH适合。 1.2.5 分装 将配置好的培养基溶液分装到10支试管分别装入1/5左右溶液，余下溶液倒入三角烧杯中。 1.2.6 加塞与包扎 1.2.6.1 棉塞的制备 取一定量棉花，将棉花整齐卷起成棒状，并扭转棉花，使它形状固定；在成型的棉 花前端加一块方形纱布，塞入仪器口，将纱布四角交叉捆绑。 1.2.6.2 包扎技术