鲤鱼肠道小肽转运载体Pept1的表达探究.pdfVIP

EXPRESSION0FINTESTINALPEPTIDE TRANSPORTERPEPTlFROM CM刚聊V【愿 翻R啪L． ADissertation Submittedto theGraduateSchoolofHenanNormal University inPartialFulfillmentofthe Requirements forthe ofMaster Degree ofScience By Ya船Xiao Supervisor：Prof．NieGuoxing 2013 May 摘 要 膜转运蛋白PepTl是研究最为广泛的一种小肽转运蛋自，主要跨膜转运二肽和三 L．)为研究对象，采用Real 肽。本研究以普通鲤鱼(Cyprinuscarpio 等分子生物学和生物化学技术，克隆了鲤鱼肠道小肽转运载体PepTl基因的全长eDNA， 的表达规律。同时，采用实时定量PCR技术，探讨了PepTl基因在鲤鱼不同组织中的 表达差异，以及寡肽对PepTl基因表达的调节作用。主要研究结果如下： 1、重组表达了具有免疫原性的多肽。以鲤鱼肠道为材料，克隆PepTl基因开放阅 I限制性酶切位点， 读框的序列全长，选取pET-32a(+)为表达载体，引入BamHI和EcoR Rosetta中，构建重组基因工程菌。经1％o IPTG诱导，基因工程菌成功表达了具有PepTl 免疫原性的片段。经SDS．PAGE电泳分析，结果显示：目的多肽分子量约为28kDa。 2、PepTl抗体制备。以工程菌表达且经过纯化的多肽为抗原，加入完全弗氏佐剂 及不完全弗氏佐剂充分乳化，采用耳缘静脉结合皮下注射法，免疫新西兰兔。先后免疫 PepTl蛋白在鲤鱼肠道、肾脏、脾脏及肝胰腺等组织中的表达定位进行研究。结果显示， PepTl蛋白在鲤鱼的前肠、中肠、后肠、脾脏、肝胰脏和肾脏均有表达。采用Real mRNA表达水平进行了定量研究。 PepTl 4、鲤鱼PepTl基因相对表达丰度对不同浓度寡肽的响应。在基础饲料中分别添加 5％、10％、15％的“维他快”(华达生化科技饲料有限公司出品，寡肽含量为49％)饲 mRNA的表达量随着寡肽添加量的升高而呈现正响应，其 喂实验鱼，结果显示，PepTl mRNA表达量随寡肽梯度呈现显著性变化。 中，中肠PepTl 关键词：鲤鱼，PepTl，PepTl抗血清，组织分布，寡肽 ABSTRACT Asthemain of an roleinthe digestion。smallpeptidesplay important digestion， productsproteins amino most andmetabolismofthe