测定鸡蛋中FQs残留的HPLC-MS方法的验证试验.doc

鸡蛋中喹诺酮类药物的多残留检测方法—液相色谱质谱联用法 验证试验报告 概述 标准复核的来源 本标准复核试验由华南农业大学广东省兽药研制与安全评价重点实验室国家十五重大科技专项“食品安全关键技术”课题《兽药残留检测技术研究》（课题任务书编号为2001BA804A18-04）课题组提出。 标准复核承担单位 本标准复核试验由广州出入境检验检疫局食品检验实验室完成。 标准复核的主要技术参数 本次复核试验主要考察了方法的特异性（空白试验）、准确性（空白添加回收率）、重复性（变异系数）以及定量的灵敏度（LOD和LOQ）和准确度（标准曲线的线性范围和相关系数）。 标准复核试验的日期和参与人员 试验日期：2005年10月20日至2005年10月23日。 参与人员：饶 勇，林 峰，林保银 实验部分 试验过程按标准复核提出单位所提供的方法进行，详细的试验过程略。 试剂 喹诺酮类药物标准品：13种QNs标准品标准复核提出单位购买并提供配制好的混合标准工作液，各化合物质量分数均为：800 ng/mL。 样品提取 样品室温解冻，称样2.0±0.01 g，添加样品加标准工作液100 μL，加0.5 mol/L PBS 4.0 mL，5 000 rpm匀浆5 min。加20%（v/v）乙腈/10%TCA 5 mL，10 000 rpm匀浆3 min，转移至30 mL聚丙烯离心管中，用另外5 mL 20%（v/v）乙腈/10%TCA洗刀头和匀浆杯，合并入离心管中，漩涡30 s；10 000 g离心6 min，上清液倒入试管中；用10 mL PBS稀释样液供SPE净化。 SPE净化 将反相聚合物SPE柱以3 mL甲醇活化,3 mL 蒸馏水平衡；上样液，保持流速约为1mL／min；10%甲醇溶液3 mL淋洗，负压抽干；甲醇3 mL洗脱。洗脱液于60～70℃氮气吹干，用1 000 μL流动相溶解残留物，旋涡混匀，12 000 g离心6 min，样液经0.2 μm滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱测定。 测定 液相色谱-串联质谱条件 色谱柱：NUCLEODUR C18柱，125 mm×2.0 mm（） μm。 流动相：A液：。(L。 流速：300 (L/min。320.0/276.0、320.0/302.0，氧氟沙星（OFL）m/z362.1/261.0、362.1/318.0，麻保沙星（MAR）m/z363.0/320.0、363.0/262.0，环丙沙星（CIP）m/z332.1/245.0、332.1/288.0，培氟沙星（PEL）m/z334.1/233.0、334.1/290.0，洛美沙星（LOM）m/z352.1/265.0、352.1/308.0，达氟沙星（DAN）m/z358.1/314.0、358.1/96.0，恩诺沙星（ENR）m/z360.3/245.1、360.3/316.0，沙拉沙星（SAR）m/z386.1/299.0、386.1/342.0，二氟沙星（DIF）m/z400.1/299.0、400.1/356.0，噁喹酸（OXO）m/z262.0/216.0、262.0/244.1，萘啶酸（NAL）m/z233.1/187.1、233.1/215.1，氟甲喹（FLU）m/z262.0/201.9、262.0/244.1。其中标记为黑体的离子为定量离子。 结果 灵敏度 13种QNs在鸡蛋中的检测限（LOD，按3倍信噪比计算）及定量限（LOQ，按10倍信噪比计算）： LOD均低于1.0 μg/L，LOQ均低于3.5 μg/kg。 准确度及精密度 在鸡蛋中13种QNs在2.0 μg/kg和5.0 μg/kg二个添加水平中的回收率在55%～92%，变异系数CV≤20%。 原始数据和谱图 监测离子的相对丰度值 13种QNs进行MRM监测的子离子的相对丰度值见表1，标准样品（用相当于流动相的样品稀释液直接稀释）和鸡蛋添加样品的相对丰度值相差小于15%。 表1 13种QNs子离子的相对丰度值 QNs 母离子 m/z 子离子m/z 测定范围 （μg/kg） 标准样品(n=6) 添加样品(n=12) 相对丰度% CV% 相对丰度% CV% FLU 262.0 201.9/244.1 1.0-20.0 57.2 7.3 54.6 10.6 OXO 262.0 216.0/244.1 1.0-20.0 17.7 14.4 18.6 15.3 NAL 233.1 187.1/215.1 1.0-20.0 75.4 13.2 73.0 15.1 NOR 320.0 302.0/276.0 1.0-20.0 29.8 11.2 26.9 19.4 MAR 363.0 262.0/320.0 1.0-20.0 43.2 17.1 42.5 20.