人胃癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析.doc

　　人胃癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析 ：李莹，韩炯，王立峰，林树新，药立波，俞强，刘新平 【关键词】 胃肿瘤 　　【Abstract】 AIM: To analyze the characteristics of the anoikis resistance of human gastric cancer cell lines（HGC27, BGC823, MGC803 and SGC7901）. METHODS: The groation assay, DNA laddering assay and floetry assay after the gastric cancer cells normal canine kidney, did not groed. The DNA ladder, the marker of apoptosis, appeared 15 h after the cell culture in suspension and the FCM assay shoena of anoikis can be observed. The four gastric cancer cells, HGC27, BGC823, MGC803 and SGC7901, are generally resistant to anoikis. 　　【Keyach neoplasms;tumor cells,cultured；anoikis 　　【摘要】 目的: 研究胃癌细胞HGC27, BGC823, MGC803, SGC7901抗脱落凋亡的特性.为研究肿瘤细胞抗脱落凋亡的机制奠定基础.方法： 应用软琼脂集落形成实验，DNA ladder检测，流式细胞术等技术观察胃癌细胞脱落培养后细胞生长状况的改变.结果： 对照组细胞MDCK（狗的正常肾脏上皮细胞系）在软琼脂中不生长，没有形成细胞集落；悬浮培养15 h后，可见有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现；流式细胞仪检测,悬浮培养24,48 h可见有凋亡峰出现.而HGC27等4种胃癌细胞系在软琼脂中均形成大小不等的细胞集落，脱落培养15 h后，没有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现，流式细胞仪检测，与贴壁培养的对照组相比细胞周期没有显著性差异，也没有凋亡峰的出现.结论： MDCK细胞属于锚着依赖性细胞，可出现脱落凋亡.胃癌细胞HGC27, BGC823, MGC803, SGC7901属于抗脱落凋亡细胞. 　　【关键词】 胃肿瘤；肿瘤细胞，培养的；脱落凋亡 　　0引言 　　不具备转移特性的实体瘤细胞和正常上皮细胞进入血流后会因失去基质的支持而发生凋亡，这一现象称为脱落凋亡（anoikis）［１，２］.除上皮和内皮细胞外，骨骼肌细胞，某些低致瘤潜力的黑色素瘤细胞以及胚胎成纤维细胞也表现出脱落凋亡现象［３］.脱落凋亡的意义在于防止这些脱落的细胞种植于其他不适当的地方.然而，很多肿瘤细胞，尤其是容易发生转移的恶性肿瘤细胞，从瘤体上脱落后并不会发生凋亡，而是可以迁徙到其他部位再次生长.这种存在于某些肿瘤细胞中的抗脱落凋亡现象，被认为是肿瘤发生转移的重要原因之一.因此，研究肿瘤细胞抗脱落凋亡的信号转导机制，已经成为近年来肿瘤治疗方面基础与临床研究的一个重要内容.本研究旨在以胃癌细胞为研究对象，分析其抗脱落凋亡的特性，为进一步研究肿瘤细胞的抗脱落凋亡的信号转导通路的异常奠定基础. 　　1材料和方法 　　1.1材料人胃癌细胞株BGC823, HGC27：中科院上海细胞库；SGC7901,MGC803：西安西京医院消化内科全军重点实验室惠赠；MDCK细胞(狗的正常肾脏上皮细胞系)：美国波士顿大学医学院肺研究中心俞强教授惠赠；RPMI 1640培养基：Gibco公司；新生牛血清：杭州四季青生物工程公司；PolyHEMA: Sigma公司；FACSCalibur流式细胞仪：BD公司. 　　1.2方法 　　1.2.1细胞脱落培养模型的建立参照文献［１］的方法，将10 g#12539;L-1溶于无水乙醇的polyHEMA 2 mL铺于55 mm的Petri 培养皿中，室温干燥，重复上述步骤一次.使用前用1×PBS洗4遍，紫外线消毒，消化细胞，计数，1×106细胞接种于60 mm polyHEMA包被的petri培养皿中.由于polyHEMA不带电荷，细胞无法贴壁，只能在培养皿中悬浮生长，借此来模拟细胞的脱落培养状态，对照组细胞为贴壁培养的细胞.所有细胞都采用含100 mL#12539;L-1小牛血清的RPMI1640培养基，置于37℃含50 mL#12539;L-1 CO2的细胞培养箱中培养. 　　1.2.2软琼脂集落形成实验配制底层5 g#12539;L-1软琼