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HPLC仪器原理 大连依利特分析仪器有限公司 应用实验室 主要内容 1. 概述 2. 高压输液系统 3. 进样系统 4. 检测器 5. 色谱柱 6. 数据处理系统 7. 其他 1. 概述 HPLC (High Performance Liquid Chromatography) 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据处理系统等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器、自动馏分收集装置、工作站等。 高效液相色谱法的基本流程 2. 高压输液系统 2.1 高压输液泵 功能：高压输液泵是液相色谱分离过程的动力装置，它将冲洗剂(流动相) 连续不断地送进柱系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。 2.2 高压输液泵的基本要求 恒流：准确度与精密度 恒压耐高压 系统死体积小 惰性表面 压力检测与保护功能 耐用、易维护 程序控制 2.3 泵的分类 世界主要HPLC仪器公司商品泵类型分布 隔膜泵 2. 气动放大泵 3. 柱塞往复泵 4. 螺旋注射泵 2.4 双柱塞往复泵结构 并联式双柱塞泵 2.5 消除脉动的方法 降低单冲程排液体积 凸轮曲线设计 改进驱动方式 脉动阻尼器 柱塞杆 2.7 部分P型高压恒流泵的技术指标 P230p高压恒流泵-双柱塞串联式 P270高压恒流泵-双柱塞并联式 3. 进样系统 3.1 功能与特点 功能： 进样系统是将待分析样品引入色谱柱的装置。 特点： 进样重复性好 死体积小 耐高压 保证中心进样 便于实现自动化 3.2 分类 手动 手动注射进样器 手动进样阀 自动 圆盘式 坐标式 其他 六通进样阀 小结 4. 检测器 连续监测色谱柱分离组分的组成和含量 UV230+紫外可见检测器 UV230+检测器特性 宽范围测定波长 集成微型光学系统和二极管阵列技术 光谱分辨率高，动态范围宽 波长准确度和重复性高 长寿命D2灯与W灯 兼容生物HPLC系统 UV230+检测器功能 开机自检：电源、灯状态与能量； 标准灵敏度 时间波长程序 高灵敏度吸收谱 错误信息提示 UV230+检测器技术指标 波长范围：190nm-----720nm 波长分辨率：6 nm 波长准确度：±0.5 nm 波长重复性： ±0.1 nm 时间波长程序：0.1min -----999.9min 响应时间设定：0.0sec.-----9.9sec. 基线噪声： ±3.0X10-5(AU) 基线漂移：≤5X10-4（AU/h） 流通池的选择 4.6 蒸发光散射检测器 有望作为新一 代通用型检测器 蒸发光散射检测器的优点及限制 优点 通用型质量检测器 灵敏度高于RI 可以进行梯度洗脱 可作为SEC和SFC色谱/细内径LC检测器 可测定磷脂、皂甙、糖类、聚合物、树脂 限制 受样品组分和流动相的挥发性的影响 4.6 其它检测器 荧光检测器/激光诱导荧光检测器 电化学检测器 联用技术： LC-MS、LC-MS-MS LC-NMR、LC-NMR-MS 小结 测得出来。 尽量灵敏、多用途。 6. 数据处理系统 什么是工作站？ 由一台个人电脑为中心，实现色谱信号数 据采集及处理，并实时控制色谱仪各部件 的运行，从而形成闭环的控制系统，称色 谱工作站。 色谱工作站的基本功能 包含色谱积分仪的全部功能 仪器控制功能 计算机软件平台所提供的功能 7. 其他 7.1 LU230低压梯度混合器 特点 采用四入一出高质量快速响应电磁阀，保证流动相组成的准确性和稳定性；? 单片机计算扣除电磁阀启动时间，使得流动相组成变化步长减少到0.1%，提高了流动相比例精度，并且有效降低了流动相切换周期，保证流动相均匀稳定；? 基于流动相流速参数控制电磁阀切换速度设定功能，保证在较高和较低流速下流动相分配的准确性，同时延长了电磁阀寿命；? 泵后静态混合器使溶剂混合快速、均匀，保证了分析结果的重现性，同时降低了基线噪声； 计算机控制和面板设置2－4元低压梯度，实时显示各通道比例；? 可选择内置DG230在线脱气机，减小了仪器组合体积。 7.2 脱气机 7.3 柱温箱 7.4 配件 7.5 HPLC分析系统 5. 色谱柱 色谱柱是HPLC分离过程的核心 1. 柱头螺丝 2. 过滤筛板 3. 色谱柱管刃环 4. 柱头压帽 5. 色谱柱柱管 零死体积连接 ? 3微米多孔二氧化硅微球 Y 16.2% 100 300 5,