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槲皮素抑制膀胱癌细胞增殖作用探究摘要：为了研究槲皮素抑制膀胱癌细胞株增殖的机理，通过细胞培养、MTT法和流式细胞仪研究70、140、210μmol／L的槲皮素对细胞的凋亡影响。结果发现，槲皮素能明显抑制癌细胞的生长，并促进细胞凋亡。 关键词：槲皮素；抑制；膀胱癌 【中图分类号】R735.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2012)06-0277-01 槲皮素(quercetin，Que)是一种天然的黄酮类化合物，广泛存在于多种植物中，尤以红麻叶和湖南连翘中含量较高，具有抗感染、抗过敏、清除氧自由基、降血脂等多种药理作用[1]。最近也发现其具有广泛的抗肿瘤的作用[2]。本实验主要探讨了槲皮素抑制人膀胱癌细胞增殖的作用机制。 1 材料与方法 1.1 材料来源:槲皮素购自Sigma公司，用DMSO(上海生物试剂厂)配成1000×储存液，-20℃保存。BIU-87人膀胱癌细胞株购自武汉大学典藏中心。 1.2 实验方法 1.2.1 分组培养:将膀胱癌细胞株培养于RPMI-1640培养基中，在对数生长期时，收集细胞并调整细胞浓度为 4×104个／ml，接种于96孔板，每孔加100μl细胞悬液。24h后，实验组分别加入终浓度分别为 0、70、140、210μmol／L的槲皮素，另一孔只加培养液，作为空白对照，每组分别设5个复孔。 1.2.2 活性检测:分别在24、48和72h后，加入20μl (5mg／ml)的MTT，4h后弃上清。再加入200μl 的DMSO，用酶标仪(波长570nm)测定各孔吸光度(A值)，并计算细胞生长抑制率。 1.2.3 细胞凋亡率检测:取对数期膀胱癌细胞，接种于6孔板，培养24h后，再加入槲皮素至终浓度70、140和210μmol／L，然后在流式细胞仪(FACS-Calibur)上进行细胞凋亡分析检测。 2 实验结果 2.1 形态观察:对照组膀胱癌细胞呈长梭形，边缘比较光滑整齐，核大。而经槲皮素处理的膀胱癌细胞开始变圆，核部分碎裂，并有部分细胞脱离培养板。 2.2 细胞活性检测:与对照组相比，各浓度间的增殖抑制率差异显著（p0.05），在槲皮素作用24h、48h、72h后，70μmol/L槲皮素的抑制率分别为19.8%、30.5%、48.1%，而140μmol/L 和210μmol/L 的抑制率分别为25.1%、42.5%、63.5%和39.4%、61.5%、82.8%。可见，槲皮素对膀胱癌细胞有明显的抑制作用，随着作用时间的增加其抑制作用也增强。 2.3 流式细胞仪检测凋亡结果:分别是0、70μmol/L、 140μmol/L 和210μmol/L槲皮素浓度作用结果。槲皮素作用24h后凋亡率分别为0.58%、12.28%、15.14%和24.31%；作用48h后凋亡率分别为0.77%、14.15%、23.32%和37.39%；作用72h后凋亡率分别为14.24%、55.48%、57.81%和62.57%。 3 讨论 研究发现，槲皮素可诱导多种恶性肿瘤细胞的生长，但槲皮素作用于人膀胱癌细胞的研究报道较少。结果显示，终浓度为70-210μmol/L 的槲皮素对膀胱癌细胞有显著地抑制作用，通过流式细胞仪检测其凋亡，随着时间和浓度的增加，凋亡率也增加，作用48h凋亡率最大达到37.39%，而到72h凋亡率达到了62.57%。其凋亡机制可能与下列因素有关：阻滞细胞周期[3]、下调热休克蛋白、诱发Bcl-2的表达等导致细胞增殖抑制。本研究建立了槲皮素抑制膀胱癌细胞生长的细胞模型，并且槲皮素还可抑制肿瘤血管生成和转移等多种途径来发挥其抗肿瘤的作用，因而推测它将是很有应用前景的治疗肿瘤的天然药物。 参考文献 [1] Nijveldt R J，Van Nood E，Van Hoorn D，et a1．F1avonoids：a review of probable mechanisms of action and potentials applications[J]．AMJ Clin Nutr，2001，74：418-425 [2] 曾文铤， 唐武兵，倪宏，等．槲皮素对人肝癌HepG2细胞的作用与机制[J]．中西医结合肝病杂志，2003，13（1）：17 [3] Martinez Florzs S, Gonzalez Gallego J, Culebras JM, et al. Flavonoids properties and anti-oxidizing action[J]. Nutr Hosp, 2002, 17(6): 271-278 1