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猪进行性萎缩性鼻炎研究进展 汤细彪 吴斌* 卢顺 罗勇 （华中农业大学动物医学院病毒室 武汉 430070） 摘 要：猪进行性萎缩性鼻炎广泛存在于世界养猪业所有国家和地区，被OIE列为B类动物传染病，是对现代集约化养猪生产危害最大的传染性疾病之一。在国内，随着集约化养殖程度的不断提高，猪进行性萎缩性鼻炎曾一度暴发流行，给我国养猪业造成巨大的经济损失。本文对猪进行性萎缩性鼻炎的流行及危害、诊断方法、疫苗及其发展进行了综述，并初步探讨了猪进行性萎缩性鼻炎的根除净化。 关键词：猪，进行性萎缩性鼻炎，流行及危害，诊断方法，疫苗，净化 猪性炎流行及其危害1.1猪炎流行现状 猪Progressive Atrophic Rhinitis, PAR)，主要是由Toxigenic Pasteurella multocida, T+Pm）引起的一种以鼻炎、鼻中隔扭曲、鼻甲骨萎缩和病猪生长迟缓为特征的慢性、高度 该病此后逐渐扩散，目前已遍布世界各地近年来我国发病率日益增高已有20多个省市报道此病的发生，某些大型集约化猪场P的阳性率达0％以上随着养猪业的迅速发展猪的跨国运输和种猪的引进对在世界各地广泛流行起到了重要的促进作用由于病可经空气和接触传染，所以集约化养殖程度越高的国家和地区发病越严重1.2猪炎是猪的重要疫病，治疗和终生危害，是集约养猪业的大敌，世界动物卫生组织[Office?Intentional?des?Epizootic(法)，OIE]将之列为B类动物疫病。目前在我国发病率逐年增长有的猪场阳性率达0％以上，已经成为集约化猪场的主要传染病之一（Lugtenberg, et al, 1984； Chanter, et al 1989；Cowart, et al, 1989； 斯特劳等，2000）。另外，T+加大疾病的危害，使之已成为危害养猪业最严重的疾病之一可见，作为一种呼吸道传染病，给世界养猪业的发展带来了巨大的经济损失严重危养猪业的。猪性炎病原学诊断方法 5mm为阳性，﹤5mm疑似，需复试，无反应或仅轻微红肿者为阴性。 利用小白鼠致死试验检测毒素的活性，Rutter和Pijoan先后做过报道。将待检菌株接种于血液琼脂平皿培养24h，用PBS洗下菌苔制成细菌悬液，冰浴超声波裂解，悬液过滤后腹腔注射小白鼠，72 h内死亡者即为DNT阳性，部分死亡者为可疑，需复试。 2.1.2 细胞毒性检测 1984年Rutter根据肉汤培养上清对胎牛肺细胞（EBL）毒性来区别T+Pm和T-Pm。在EBL毒性实验中，向长成单层的细胞悬液中加入毒素稀释液，密封37℃培养3天，细胞经固定、染色，干燥后进行镜检。Pennings（1984）等用非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）检测细菌毒素，从T+Pm抽提毒素后，加入到培养好的Vero细胞单层上，观察结果。1998年，Amigot首次报道可使用猫科胎儿肺细胞（FLF）检测T+Pm。1986年Chanter等建立了一种快速的琼脂覆盖细胞培养试验，用于检测疑似T+Pm的菌落。 2.1.3 聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction PCR） T+Pm所分泌的一种皮肤坏死毒素（Pasteurella multocida toxin，PMT）在PAR中发挥着重要的作用，因此对于PAR的检测关键在于是否有PMT或T+Pm的检测。随着对T+Pm毒素toxA基因分子生物学研究的不断深入，国内外已经建立了多种PCR病原学诊断方法用于PAR的早期诊断和细菌的快速鉴定1996年Kamps等探索出一种适合于大规模普查检测鼻拭子和扁桃体拭子中T+Pm的 PCR方法，拭子中的细菌经硫氰酸胍裂解、核酸酶灭活后，加入硅藻土以提取DNA。利用两对引物来扩增toxA中的两个特定片段，特异性、敏感性大大提高。巢式PCR研究方法提出后，2001年Choi和Cha等考虑设计巢式PCR用于进一步检测鼻拭子中的T+Pm，其特异性和敏感性比常规PCR要提高许多，并能检测到大约20个细菌数，适用于流行病学调查。 唐先春等（2004）报道应用二重PCR的方法来检测T+Pm和T-Pm。敏感性达到103CFU的细菌检出量，临床上得到较好的应用。目前，华中农业大学动物医学院病毒室已建立了应用巢氏PCR方法从猪鼻拭子快速检测T+Pm，该方法能检出20CFU的细菌数，正在临床上推广应用。 2.1.4菌落原位杂交 Magyar等（1991）、KarenB. R.等（1998）应用菌落原位杂交分析法，检测初级培养物中的单一菌落，该方法不需要对受检细菌进行纯化培养，通过杂交后显示特定的颜色进行鉴定。结果与其它常规鉴定试验如菌落形态结合法、生化反应法、小鼠致死试验、ELISA的结果作对比，显示出前者具有极高的敏感性和较好的特异性。 2.2 血清学诊断方法