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消毒灭菌的方法、影响因素及不同种类物品培养基的灭菌方法 （一）物理灭菌：高温灭菌法（干热、湿热）、过滤除菌法、射线灭菌法、超声波灭菌法 （二）化学灭菌法： 消毒剂消毒法、抗菌素抑菌法 （三）影响因素：消毒剂的性质浓度作用时间、微生物的种类数量、温度和酸碱度、有机物 （四）不同种类物品培养基的灭菌方法：培养基湿热灭菌、器械器皿灼烧干热灭菌、不耐热物质过滤除菌、空间紫外线和熏蒸灭菌、物体表面药剂喷雾消毒、实验材料消毒剂消毒。 2、植物培养基成分：水、无机元素（大量：CHONPJGaMgS；微量：FeCuMoZnNaMnCoB)、有机元素（氨基酸类、维生素类、肌醇、天然有机添加物类）、生长调节物质（生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类）、碳源和能源、琼脂、活性炭 3、动物培养基成分：水、无机盐、微量元素、维生素类、缓冲系统、能源和碳源、氮源、激素和生长因子、添加剂 4、动物培养基制备：天然培养基（血清、水解乳蛋白、胚胎提取液、胶原）、合成培养基、无血清培养基、平衡盐溶液（生理盐水、平衡盐溶液） 5、植物细胞全能性及分化 全能性：指植物体的每个活细胞都具有该植物的全套遗传信息，与合子一样具备发育成完整植株的潜能。 分化：指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，最终产生标志性蛋白质。 脱分化：在某些条件下，分化了的细胞也不稳定，其基因表达模式也可以发生可逆性变化，又回到其未分化状态，这一过程称为去分化。 再分化：指已经去分化形成的胚性细胞在某些刺激条件下(例如创面神经组织分泌的成纤维细胞生长因子诱导，以及创面产生的生物电流刺激等)，重新启动开始分化发育的过程。 植物细胞分化过程：诱导期、分裂期和分化期 ①诱导期：又称启动期，是细胞分裂的准备期。②分裂期：细胞从开始分裂到持续分裂的时期③分化期：愈伤组织形成到器官发生时期 植物体细胞胚胎发生特点及发生途径 特点：①胚状体是离体培养的产物，也是有细胞脱分化产生的，因此胚胎发生能力是培养的植物组织细胞具有的一个基本特征。②胚状体起源于非合子细胞。③胚状体发育过程和合子胚相似，经历球形期、心形期、鱼雷期和子叶期阶段。 途径：直接从器官外植体上发生、愈伤组织发生、悬浮培养细胞发生、单倍体细胞发生、原生质体发生。 激素对胚状体发生的影响 前期需要激素，后期不需要激素或需要极低浓度的激素： ①生长素作用分为两个阶段：生长素对愈伤组织的诱导及胚胎发生丛的形成必不可少。 ②由于生长素浓度降低而提高了细胞分裂素与生长素的浓度比，迫使愈伤组织中的分生区细胞分裂，逐渐形成胚胎发育条件。 ③细胞分裂素与生长素浓度比低则促进胚胎细胞生长，若比值高则促进胚胎发育。 植物离体无性繁殖中器官发生方式：不定芽型、器官型、器官发生型、胚状体发生型、原球茎发生型。 植物离体无性繁殖方法：母株制备、增值、植株再生及鉴定、炼苗和移植。 单细胞培养方法： ①细胞悬浮培养（分批、连续）：将植物游离细胞或极小的细胞团在液体培养基中进行培养 ②看护培养：用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增值的方法 ③平板培养 ④微室培养 植物次生代谢物的工业生产：选材、高产细胞株系的筛选和建立、大量培育、有效成分的分离和提取。 突变体筛选方法：直接选择法（正选择法、负选择法）、间接选择法、绿岛法 脱分化培养方式选择：固体平板培养、液体培养、双层培养、分步培养、条件培养、看护培养、微室培养。 植物原生质体 原生质体培养目的：实现远缘物种体细胞杂交，使外源染色体、DNA或细胞器导入，创造新的远缘杂交。包括原生质体分离、培养、体细胞杂交、杂交细胞产生愈伤组织及再生植株。 概念：指用特殊的方法脱去植物细胞壁的、裸露的、有生命力的原生质团。 意义：单细胞无性系的建立、遗传转化的良好受体、多种基础研究的实验体系、体细胞杂交种的形成。 原生质体分离方法：机械分离法、酶解分离法、 纯化方法：离心沉淀法、漂浮法、界面法、 活力测定：形态识别、荧光素二乙酸酯染色法、其他方法（伊凡蓝染色法、相差显微镜观察法、酚藏花红染色法） 培养方法：液体浅层培养法、平板培养法、固-液双层培养法、看护培养法 再生过程：细胞壁再生、细胞分裂、植株再生 植物体细胞杂交 原生质体融合方法：自然融合法、诱导融合法 诱导融合法：①化学融合 NaNO3融合法、高PH高浓度钙离子融合法、PEG融合法 物理融合法：电融合法 同合体、异合体、胞质杂交、胞质体 名词解释 细胞质杂种产生途径：①一个正常原生质体和一个去核原生质体融合②一个正常原生质体和核失活原生质体融合③异核体形成后，两个核中一个