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RA33ELISA试剂盒说明书
RA33ELISA试剂盒说明书人异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用???????目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)水平。用纯化的人异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33),再与HRP标记的异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)浓度。试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份?封板膜2片(48)2片(96)?密封袋1个1个?酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:90ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3?ml×1瓶6?ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3?ml×1瓶6?ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3?ml×1瓶6?ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3?ml×1瓶6?ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1.?血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2.?血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3.?尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.?细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5.?组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6.?标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.7.?不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.?标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为60ng/ml,40ng/ml?,20ng/ml,10ng/ml,?5ng/ml)。2.?加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.?温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4
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