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动物细胞核的分离与鉴定 临床六班第二组 加绒疵秋养硼酸轴间骚瓜张茫淳阿蓝均泥稳鸣鲍制烧煌守雌朝诸嵌藩夯蓄动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 小组成员 吴文胜：1110150626 夏禹： 1110150627 穆顺峰：1110150635 卢伟： 1110150640 木苗都蒸光碑旁西哇缮浴荡走秤古绥划泳苍济识肚错护鹿拒膳匝坊瓮概绅动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 实验大纲 小组成员 实验原理 实验步骤 注意事项 实验仪器、设备、器具表 实验试剂表 预期结果 凹哑仕巡蓟梧唁嘲捆除哎傣该店物逗抢款煮劲啦悸确颂焚伯嫁邀辐方姬牢动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 二、实验原理 核体的制备方法:核体是指含有少量细胞质并由质膜包裹的细胞核。因为在实际中我们不可能100%的得到细胞核，因此,我们只能制备含有少量细胞质的核体，核体的制备方法主要有吸出法和原生质体破裂法和排除法等。在本实验中我们采用排除法来制备核体。 聪承焦酚甩穷顽积诉前希柱娜胜苔肆项宫侗爹酪粮病股沙冗梅泰女蚌券演动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 XY 排除法制备核体:通过细胞松弛和高速离心的作用使细胞核排出，然后从离心管底部沉淀中收集获得核体。 痉宾谋行呸胃卿蚁返佬粒矣窗恰范焦遂宇志账精殿锰捻恍膛涂咐肯欣琼浇动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 XY 细胞核的鉴定:因为细胞核中主要含DNA，呈酸性(但本组染的是细胞核的碱性部分）。因此将分离出的核体经三氯醋酸处理, 抽提出核酸后，利用碱性固绿溶液染色性，可以使细胞核内的碱性蛋白显示出来。 枷崎绚朋机悼樱草书袜涅哪仍撂呢艺巷凝枣锥诛畴敷亮怜隧侈夏妆痘千锯动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 三、实验步骤 1、细胞培养（因为培养时间过长，所以由老师帮助完成，选讲，试剂不用自备) 2．秋水仙碱处理：细胞培养一段时间以后加入0.1μg/ml的秋水仙碱，处理细胞48～60min。并固定在圆板上。 匙脓魔亡舷提彦蜂椽傲驭颅爆奏沏肾缕藤侥忻篱柏肢殴兹断雹悉雌捌菠建动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 XY 3．细胞松弛素处理：在离心管内加入5ml预热至37℃的细胞松弛素B溶液将固定有动物细胞的圆板面朝下放入离心管内，固定圆板位置后,再加入 10ml37℃的细胞松弛素B溶液。 4．离心：在1000～15000r/min核体从细胞排出。 央杆柏炬晦窄斌幅擎汰暖沂沁鸣救荒六童萤骨采概尺胺辅欣即赔贞衣成狂动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 XY 5．收集核体：由于核体的贴附力弱，可以从离心管底部的沉淀中收集。 6．固定：将收集的核体涂于玻片上制成涂片，滴15%乙醇于涂片上，固定5min，室温晾干。 　　　　 局泰担蚕镁搏胀绝使毯塞驳骏躬贵驾甭毖嘱闯笨选妒嗡厉田太蛊奈栓嚣痕动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 XY 7．三氯醋酸处理：将已固定的血涂片浸在90℃的三氯醋酸溶液中处理20min，细流水反复冲洗玻片上的三氯醋酸直至冲尽。用滤纸吸于玻片上多余水分晾干。 8.染色：将制作好的涂片放入0.1%碱性固绿染液中染色10～15min，细流水冲去多余染液，晾干，镜检。 　　　　　　 灼沧琉昼狄辜处产魂丝吠狰篡巴福括驳版颈爸怔吮寅凰梨息壶裂铆骂严努动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 四、注意事项 1、在离心管内加入的5ml细胞核松弛素B溶液要预热到 37 ℃，因为只有这样才接近动物的最佳体温37 ℃。 2、涂片在用三氯醋酸处理时，时间不宜过长或过短，过长会使核膜裂解，过短使抽提的核酸不够。 疮辊崩谦潍康翔舶秸餐古协舷憾瘫褪乐蹭湍扩夺巩频湾辰煤力渝僵翟陈镭动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 XY 3、在染色时，时间一定要足够，否则染色不完全得不到理想的实验结果。 4、因去掉胞质的核体贴附能力弱，因注意在固定、三氯醋酸处理、染色时、尽量避免胞核的脱落。 绝系死聋尔荚多钦我登颂懊世寇厚办惠污姥辩已赐吐妻闹险羹遇丈坡朱探动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定 五、实验仪器、设备、器具表 名称 规格、型号 数量 说明 普通光学纤维显微镜 1 离心机 1 量筒 载玻片、盖玻片 2 离心管，废液缸 4 中盒扎蹈闷疟揭染五脆菜腔万塔粥惜许姆厂握猎察落魄蟹榷耍瓜渣韦寒豁动物细胞核的分离与鉴定动物细