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第六章 LC/MS方法开发 ©2008 Waters Corporation LC/MS 方法开发 电离技术 适宜的溶剂和添加剂 改进现有的分离方法以适用于 MS ©2008 Waters Corporation 2 优先使用 HPLC 方法 了解样品和基质的化学性质 —不易挥发 —表面活性剂或离子对 —pH —需要净化 考虑与 MS 检测的兼容性问题 —是否会增加维护量 —潜在的降低灵敏度或信号的可能 —可能增加色谱峰的其它因素 ©2008 Waters Corporation 3 ESI 还是APCI 先天性离子 — 季铵盐 — 强酸或强碱 — Chlorhydrates, 硫酸盐, tris salt — 金属络合物 首选ESI — 不需要添加剂 — 生成簇离子的可能性 ©2008 Waters Corporation 4 ESI 还是APCI 极性分子, 多官能团的分子 — 具有一些离子化位点的分子 o 胺或醇 ESI, 正离子模式 APCI,正离子模式 o 酸 ESI, 负离子模式 APCI,负离子模式 ©2008 Waters Corporation 5 ESI 还是APCI 没有电荷点位的分子 —多环芳烃 —有机金属化合物 APCI,正离子模式 APCI,负离子模式 ESI ,使用添加剂 ©2008 Waters Corporation 6 ESI 还是APCI 大分子 —肽, 蛋白质 o ESI,正离子模式 — 寡核苷酸, 低聚糖 o ESI,负离子模式 ©2008 Waters Corporation 7 pH 的考虑 碱性化合物的分析 – 使用正离子模式 — 用酸调低 pH o 甲酸或乙酸 酸性化合物的分析 – 使用负离子模式 — 用碱调高 pH o 氢氧化铵 混合物或未知物的分析 – 使用正/负离子切换(可能的话) — pH 应当 4 可能更有效 ©2008 Waters Corporation 8 控制pH 流动相的 pH 比目标分析物的pK 高 +/- 1.5 单位 a 缓冲盐的有效缓冲范围:目标化合物的pKa +/- 1 单位 尝试低浓度的“添加剂” —0.1 % 乙酸, 甲酸, 三氟乙酸 (TFA) —5-10 mM 乙酸铵或碳酸氢铵