口蹄疫病毒VP1基因疫苗制备及其对小鼠免疫效果的评定.pdfVIP

动物医学进展，2008，29(1)：1l3一ll5 Progress in Veterinary Medicine 口蹄疫病毒VP1基因疫苗制备及其对小鼠免疫效果的评定 黄东璋 。，罗满林 (1．华南农业大学兽医学院，广东广州 510642；2，江苏畜牧兽医职业技术学院。江苏泰州 225300) 摘 要：利用已构建的插有口蹄疫病毒VP1基因的真核表达载体重组质粒，转化到大肠埃希菌中，进行 扩大培养后，提取含有 VPl基因的重组质粒 pcD—VPl，用 pcD—VPl DNA通过肌肉注射途径多次接种实验 鼠，待其产生抗体后，制备血清，检验血清中抗体对口蹄疫病毒攻击的保护率，进行免疫效果的评定。结果表 明，用含有VPl基因的质粒 pc VPl免疫接种小鼠后产生的抗体对口蹄疫病毒的攻击有一定的保护作用， 从而为 VPl基因疫苗的研制应用提供了一定的依据。 关键词：口蹄疫病毒；VPl基因；免疫；抗体效价 中图分类号：$852．659．6 文献标识码：B 文章编号：1007—5038(2008)01—0113—03 口蹄疫(Foot—and—n~ouIh disease，FMD)是由口 疫中获得成功，在其他血清型中未获得较好效果L2]。 蹄疫病毒引起的偶蹄动物的急性、热性高度传染性 而把VP1插人到其他载体病毒中，其表达产物的免 疾病。患病动物表现为口、舌、唇、蹄和乳房等部位 疫原性更高。本试验旨在利用构建的FMDV VP1 发生水泡，破溃并形成烂斑。该病在世界上分布广， 基因表达盒的真核表达载体 pcD—VP1进行基因免 感染率高，一般呈良性经过，病死率只有2 ～3％， 疫，收集免疫实验鼠的血清进行乳鼠中和保护试验， 但其引起患畜严重掉膘、产奶量下降、幼畜大量死 以确定基因疫苗免疫的可行性及效果。 亡、孕畜流产和早产等，给畜牧业造成极大的危害。 l 材料与方法 世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的疾 1．1 材料 病。其病原口蹄疫病毒(Foot—and—n~ouIh disease vi— 1．1．1 细胞 BHK一2l(仓鼠肾传代细胞)由华南农 rUN，FMDV)为小 RNA病毒科口蹄疫病毒属成员， 业大学传染病实验室保存。 病毒粒子为正二十面体，完整的病毒颗粒包括衣壳 1．1．2 病毒 O型 口蹄疫流行毒株暂命名为 和RNA两部分，衣壳由VPl、VP2、VP3和VP4组 GD。。，由罗满林分离并保存。 成，无囊膜结构，其中VP1是最重要的抗原位点，同 1．1．3 小鼠 健康昆明系实验鼠购自广州军事医 时也是病毒抗原变异的关键所在_1]，所以研究此位 学研究所。 点对病毒的抗原结构具有重要意义。 1．1．4 真核重组表达质粒 含有口蹄疫VP1基因 VP1是口蹄疫病毒中惟一能够产生中和抗体的 表达盒的重组质粒 pcI)-VP1，由罗满林构建并保存。 最重要的结构蛋白，它以突起的形式暴露在病毒粒 1．1．5 Ⅵ’l引物 上游引物1．1：5 ( Ar( AT— 子的表面，在免疫中发挥着主要作用。在口蹄疫病 GA(x二A(=C1 FGC(-K；GI、G 3 ；下 游 引 物 L2：5 毒的4种结构蛋白中以VP1的变异性最强，因此， 0[ AC1、CGAG1vIAGT0GAAG AGAAGC 3 。 在疫苗研制上使用本疫区流行的VI蹄疫病毒 VP1 上、下游引物都在5 加了3个保护性碱基，在上 结构蛋白进行免疫研制，具有较好的免疫效果。同 游引物加BamH T酶切位点和起始密码子ATG，下 时，由于传统弱毒和灭活疫苗存在毒力返强和灭活 游引物加Xho 1酶切位点和终止密码子TTA，全长 不彻底等缺点。因此，口蹄疫的基因工程疫苗和基 678 bp。由罗满林设计。 因疫苗研制一直是研究的热点。早在 l981年