1.2《基因工程基本操作程序》.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序;邹坍燥知荚咳熊敦厦吧浓战蹋鉴腑妻裤崎径裤沁祸塔印厨叭泄絮吻吏泞颖1.2《基因工程基本操作程序》1.2《基因工程基本操作程序》;;一、目的基因的获取;1、从基因文库中获取目的基因;;原核细胞的基因结构;;;1．下列关于基因结构的认识中，正确的是 （ ） A．大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列 B．乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子 C．大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的下游 D．水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列 2．（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是 （ ） A．编码区都有能编码蛋白质的序列 B．编码区都是连续的 C．非编码区都能调控遗传信息的表达 D．非编码区都有RNA聚合酶结合的位点;提取某种生物的全部DNA;提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA;mRNA; 真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗？有哪些差异？原核生物基因呢？;;（3）构建基因文库的目的;依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性;;;基因组DNA文库;基因组DNA文库与cDNA文库的比较;构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA ;2、利用PCR技术扩增目的基因;5’;PCR技术;③过程：;③过程：;令亦揉司缩硕匀腹遵柄缆舱黄换层识萧猖兰蹋专肝联茂肆窗谰定谓看咳裹1.2《基因工程基本操作程序》1.2《基因工程基本操作程序》;PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增;④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）;;?;蛋白质的氨基酸序列;反转录法;一、目的基因的获取;2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥;3、 在基因工程中，把选出的一个目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4次，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是（ ）个;加热至95摄氏度的目的是使DNA中的 断裂，这一过程在细胞内是通过 解旋酶 的作用来完成的。 当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最后合成2个DNA分子，此过程中的原料 ，遵循的原则是 。 Taq酶的特点是（ ） A.耐强酸 B.耐强碱 C.耐高温 D.最适温度37摄氏度 4.请指出PCR技术与DNA复制过程的区别 ;在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是 ①双链DNA分子为模板 ②ATGTG或TACAC模板链 ③四种脱氧核苷酸 ④四种核苷酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物 ⑧温度变化 ⑨恒温 A．①③④⑦⑧⑨ B．①②④⑥⑦⑧ C．①②⑤⑥⑦ D．①③⑥⑦⑧;在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是 A、化学合成法? ? B、基因组文库法 C、cDNA文库法?? D、聚合酶链反应;（1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用___________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。;质粒;Hin d限制性酶ⅠⅡ;2.基因表达载体的组成：;3、基因表达载体的作用;不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达； （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； （4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等； （5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因