RNAi沉默PRL1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响.docVIP

　　RNAi沉默PRL1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响 ：钟锡明，范钰，张瑞佳，郑金旭 【摘要】 　　目的： 探讨RNA干扰(RNA interference，RNAi)沉默促肝细胞再生磷酸酶 1(phosphatase of regenerating liver cell1，PRL1)基因对肺癌细胞侵袭力的影响。方法： 应用PRL1 基因小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）转染处理肺癌A549细胞后，分别采用实时定量RTPCR和蛋白质印迹检测PRL1基因mRNA和蛋白水平，分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。结果： 与对照组比较，siRNA转染组PRL1 mRNA和蛋白水平明显下调，且呈浓度和时间依赖性（Plt;0.05，Plt;0.05）。体外试验发现，PRL1 siRNA可有效抑制肺癌细胞集落生长和侵袭能力，且与浓度相关（Plt;0.05，Plt;0.05）。结论： PRL1基因在肺癌侵袭中起着重要的作用，采用PRL1 siRNA转染可抑制肺癌细胞侵袭。 【关键词】 肺肿瘤； 促肝细胞再生磷酸酶1； 侵袭； RNA干扰； 小干扰RNA 　　［Abstract］Objective: To study the effects and mechanism of phosphatase of regenerating liver cell1（PRL1）small interfering RNA（siRNA）on invasion of human lung cancer cell.Methods： After lung cancer cell line A549 RNA and protein of PRL1 ined by real time RTPCR and ined by clon formation in soft agar,and invasion ability ber model. Results： The siRNA could doRNA and protein of PRL1 in a dose and time dependent manner. Suppression of of PRL1 expression can inhibit invasion ability and anchorageindependent groanners（Plt;0.05, Plt;0.05）. Conclusion： PRL1 gene might play an important role in development of human lung cancer, and doan lung cancer cell. 　　［Key a； phosphatase of regenerating liver cell1； invasion；RNA interference； small interfering RNA 蛋白酪氨酸磷酸酶(proteintyrosinephosphatase,PTP)在蛋白磷酸化和去磷酸化平衡中起着重要的作用。促肝再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver,PRLs)是PTP酶家族重要成员之一，该基因家族包括PRL1，PRL2，PRL3 三个成员,它们分别定位在6q12,1p35,8q24.3染色体上,彼此之间的同源性高达76%～85%［1，2］。 　　许多实验研究发现，PRLs分子能导致细胞的恶性转化并且增强肿瘤细胞的增殖、移动、浸润和转移能力［3-10］。但目前对PRL1基因在肺癌细胞侵袭中的研究甚少。本研究借助于RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术，以合成的PRL1基因小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）转染处理肺癌A549细胞，观察了PRL1 siRNA转染对癌细胞侵袭力的影响。 1 材料与方法 　　1.1 材料 　　人肺癌A549细胞，购自上海生命 科学 院。PRL1 siRNA序列（5′GAUGCAGUUCAGUUUAUAATT3′和5′UUAUAAACUGAACUGCAUCTT3′），由美国Dharmacon公司合成。PRL1抗体购自Santa Cruz公司。Trizol，RNase抑制剂，逆转录酶SSRTⅡ，Taq酶和转染试剂Oligofectamine购自美国Invitrogen公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养及转染处理 　　肺癌A549细胞在含10％胎牛血清的RBMI 1640培