RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响.docVIP

　　RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响 ：祁卫东 蒋鹏程 张恒 马圭 范钰 【摘要】 目的： 探讨中期因子(midkine，MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响。方法： 培养人胃癌BGC823、HGC27、MGC803及SGC7901细胞株，以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者。采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株，分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平，然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性，以Boyden方法检测癌细胞侵袭力。结果： 4株胃癌细胞中，中期因子均有不同程度的表达，以胃癌BGC823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC823细胞后，癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降，且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降，细胞侵袭力明显下降。结论： 中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞，可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力。 【关键词】 胃癌; 中期因子; RNA干扰; 黏附; 侵袭 　[Abstract] Objective: To study the effects of midkine(MK) gene small interfering RNA(siRNA)on adhesion and invasion of human gastric cancer cell. Methods: Real time PCR RNA expression of human gastric cancer cell lines BGC823,HGC27,MGC803 and SGC7901.The cell of MK highest expression RNA and proteinined by realtime quantitative PCR and immumoflurescence method.The cell adhesion ined by Boyden chamber,respectively. Results: Cell line BGC823 shoRNA in four gastric cancer cell lines. The results from realtime quantitative PCR and immumoflurescence method shoRNA and protein reduced in timeand dosedependent manners(Plt;0.01;Plt;0.01).The adhesive, and invasive ability of BGC823 cell treated ight play an important role in adhesion and invasion of human gastric cancer cell. siRNA targeted MK could effectively inhibit adhesion,migration,and invasion of human gastric cancer cell. 　　[Key a; midkine; RNA interference; adhesion; invasion 　　尽管胃癌的诊断和 治疗 已经有了长足的进步，但进展期胃癌的预后依然很差，5年生存率徘徊在20%～30%。己经证实，胃癌的发生 发展 是多基因改变的结果。胃癌中特殊基因的表达异常在不同的细胞功能中发挥了重要作用，如细胞黏附、信号传导、细胞分化、细胞增殖及转移。更好地了解胃癌发生发展的分子机制将有利于胃癌的诊治及预防。 　　许多研究表明生长因子不仅促进组织细胞的增殖，而且能诱导组织细胞的恶性转化，在肿瘤的发展中发挥了重要的角色。中期因子(midkine，MK)基因是1988年Muramatsu等[1]在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系HM1细胞cDNA文库中发现的一种新基因，其后，在多种动物和人类中均已发现了中期因子基因。中期因子和另一种相似的细胞因子——多效生长因子(pleiotrophin，PTN)一起归为一类新的肝素结合因子家族(heparin binding factor family)[1]。研究发现，中期因子在许多肿瘤如食管癌、结肠癌、胰腺癌、肝细胞癌、肺癌等多种癌细胞和组织中过表达，而在正常组织中表达很低或不表达[2-7]。因此，中期因子有可能作为肿瘤标志物在肿瘤的诊断、预后和治疗中发挥作用。目前，关于中期因子与胃癌的关系研究较少。 　　本研究以胃癌细胞为模型，以小干扰RNA(