三种荆州半夏的ITS序列分析与种属鉴定.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（１）：４１４５ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 三种荆州半夏的ＩＴＳ序列分析与种属鉴定 １ １ １ ２ １，２ 张文涛 　喻　静 　刘亦良　张本厚 　陈集双 （１南京工业大学生物与制药工程学院　南京　２１１８１６　２南京工业大学大丰海洋产业研究院　盐城　２２４１００） 摘要　通过采集自湖北荆州地区的三种不同表现型的半夏属植物的叶片组织中提取基因组，纯 化后经直接ＰＣＲ扩增得到其对应的ＩＴＳ序列并测序。运用ＮＣＢＩＧｅｎＢａｎｋ数据库进行序列比对 与进化树分析。根据比对与分析结果，结合植物形态学特征显示，ＨＢＢ０１为Ｐｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａ，为 《中国药典》中规定的半夏类药材品种；ＨＢＤ０２为Ｐ．ｔｒｉｐａｒｔｉｔａ，为药用半夏的混淆品；ＨＢＦ０３的 结果较为复杂，其不仅与芋属（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）天南星属（Ａｒｉｓａｅｍａ）、半夏属（Ｐｉｎｅｌｌｉａ）等植物ＩＴＳ序列 的同源性高达８０％以上，而且在进化关系上，它们也有一定关联。所以推测ＨＢＦ０３可能为天南 星科不同属但亲缘关系较近的植物产生的变种，具体种属来源有待进一步论证。通过三种半夏 种属来源及其亲缘关系的分析，鉴定了荆州地区的半夏人工种植的主要品种，对其当地药农种植 符合《中国药典》规范的半夏药材具有指导意义，为后续优质半夏资源的保护与选育提供了参考 依据。 关键词　半夏　种质资源　分子鉴定　亲缘关系 中图分类号　Ｑ３４９ 　　半夏［Ｐｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｂｒｉｅｔ］隶属天南星 半夏药材及饮片的描述特指三叶半夏，其他都是在市 科（Ａｒａｃｅａｅ），是我国传统大宗常用中药材，其块茎入 场上和药用中的伪品。同时，半夏种群内部变异明显， 药，具有止咳、镇吐、抗早孕等功效，是临床上常用的镇 如叶形有心形叶、柳叶形、桃叶形的区别；块茎的圆形 ［１］ ［２］ 与椭圆形区别；珠芽数量的区别；染色体倍数变化的区 咳祛痰药 。全球约有 １０５属，３７００多种 ，其主要 分布在亚洲东南部。在天南星科 １０５属中，处于南星 别等。造成这些变化的主要原因是地域差异和不同生 亚科的半夏属（Ｐｉｎｅｌｌｉａ）是唯一的东亚分布型，该属植 态环境导致其生态型的多样性。本研究主要利用ＰＣＲ 物目前在中国已报道的有 １０种，分别为滴水珠（Ｐ． 技术扩增植物ｒＲＮＡ基因转录本的ＩＴＳ保守序列，通过 ｃｏｒｄａｔａ）、石蜘蛛 （Ｐ．ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）、掌 叶半夏 （Ｐ． ＮＣＢＩＧｅｎＢａｎｋ数据库进行序列相似性进行比对分析，进 ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ）、盾叶半夏（Ｐ．ｐｅｌｔａｔａ）、半夏（Ｐ．ｔｅｒｎａｔａ）、 而了解三种荆州半夏在分类学上的地位及其种属来源与 大 半 夏 （Ｐ． ｐｏｌｙｇｈｙｌｌａ）、鹞 落 坪 半 夏 （Ｐ． 亲缘关系，为指导湖北荆州地区栽培种植符合药典规定 ｙａｏｌｕｏｐｉｎｇｅｎｓｉｓ）、三裂叶半夏（Ｐ．ｔｒｉｐａｒｔｉｔａ）、姊归半夏 的半夏药材和选育优质半夏资源提供参考依据。 ［３］ （Ｐ．ｚｉｇｕｉｅｎｓｉｓ）及五叶半夏（Ｐ．ｔｅｒｎａｔｅ） 。 １　材料与方法 　　近年来，半夏作为一类药用植物，泛指三叶半夏 １．１　实验材料 ［Ｐｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｂｒｉｅｔ］，还包括掌叶半夏、盾 　　本实验所用样品于２０１３年５月同期采自湖北省荆 叶半夏、水半夏 ［Ｔｙｐｈｏｎｉｕｍｆｌａｇｅｌｌｉｆｏｒｍｅ．（Ｌｏｄｄ．） 州地区半夏种植基地田间，三种半夏属植物分别标记为 Ｂｌｕｍｅ］等，它们都有类