蛋白质纯化鉴定及结构与功能分析.PDF

第五章蛋白质纯化、鉴定及 结构与功能分析-1 杜 芬 Email ：fen.du@whu.edu.cn 第一节蛋白质纯化的策略和思路 A black art (proteins have personality) Requires knowledge of protein What kind of cell is it coming from What part of cell What does it do Particularly helpful Size Composition 生物大分子结构与功能 2 Strategy Move from organism to pure protein in as few steps as possible with as little loss of activity (assayable quality) as possible Time and temperature are factors 生物大分子结构与功能 3 Protein Purification Molecular weight Charge Solubility Affinity 生物大分子结构与功能 4 微生物 植物 动物 细 高压细胞破碎仪、超 研磨、高压细胞破碎仪、 胞 匀浆法，使用2~5倍体 声破碎等方法，多用 匀浆等方法，使用1~3 裂 积的缓冲液，或绞碎 5~10倍体积的裂解液 倍体积的裂解液。注意 解 并用裂解液搅拌 对细胞壁的破碎 去除 核酸等 酚类等次级代谢物等 组织中的脂肪等 杂质 蛋白 不含去污剂的裂解 含去污剂的裂解液充分溶解，离心 质的 液充分溶解，离心 分离 上清液 上清液 沉淀 沉淀 （细胞内的大多 （起始提取物） （难溶性蛋白质） 生物大分子结构与功能数蛋白质） 5 上清液 沉淀 分级分离第一步：使用盐分分级 重悬，用其他溶剂（含去垢剂） 分离、有机溶剂沉淀、亲和法和 充分溶解，离心 两相分配 蛋 白 分级分离第