第五章质谱法测定分子结构(二)大分子.pptVIP

仪器 鉴定率 肽质量指纹谱 MALDI ~50% (Peptide Mass Fingerprinter, PMF ) 多肽序列标签 LC/MS/MS ~80% (Peptide Sequence Tag, PST) 从新测序 LC/MS/MS 80% (De Novo) 蛋白质及混合物的定量分析： 同位素编码亲和标记 (Isotope-Coded Affinity Tags, ICAT) 蛋白质序列研究的三个层次 蛋白质组研究技术路线 样品(组织、细胞等) 凝胶图象分析 蛋白质鉴定 二维数据库 酶解 HPLC-MS、MS/MS 数据库检索 二维凝胶电泳 酶解 肽混合物 MS、MS/MS 肽指纹谱 肽序列标签 从新测序 一、肽质量指纹谱(Peptide Mass Fingerprinter, PMF) PMF测定速度快。 PMF灵敏。 PMF需要完整和准确的蛋白质序列数据库。 分离的酶解的蛋白质 96/384位样品靶 数据处理和数据库检索 质谱样品的准备 MALDI质谱分析 蛋白质一级结构结果 PMF方法的一般流程 洗胶/去污 脱水 减少S-S键 洗涤/脱水 1、In-gel 酶切/消化 Multiprobe (4x96 Well Plat)