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液相色谱 海南大学公共实验中心 周雪晴 第一章 前言 发展历史 1903年, 俄国植物学家Tswett创立色谱法 20世纪40-50年代, 纸色谱法和薄层色谱 1952年, James和 Martin提出气相色谱 20世纪60 年代后期，高效液相色谱HPLC 色谱的定义 定义：物质在流动相和固定相之间进行分配来达到分离 的一种方法。 利用待分离混合物中各组分物理和化学性质的差异，在 互不相容的两相中分配程度不同，当两相相对运动时， 各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物中各 组分得以分离。 色谱分类 按流动相分：气相色谱、液相色谱 按固定相附着方式：柱色谱、纸色谱、薄层色谱 按分离机理：分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、凝 胶色谱（分子排阻色谱） 第二章 高效液相色谱法 工作原理 用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的 混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样 品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器， 由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号或进行 数据处理而得到分析结果。 样品组分分离示意图 色谱术语： 色谱图、保留时间、死时间、 峰高、峰面积、峰宽、半峰 宽、分辨率、柱效、塔板数 液相色谱图谱与相关术语 色谱分析可以认为进入柱子内的样品成分在流动相中是 呈“正态分布”的，我们可以根据 tR （峰的位置〕来定性；根 据峰面积或峰高（h）来定量。 无保留物质 •1、色谱图（chromatogram）：色谱柱流出物通过检测器系统时 所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图，或者通过 适当的方法观察到的纸色谱或薄层色谱斑点、谱带的分布图。 2、（色谱）峰（chromatographic peak）：色谱柱流出组分通 过检测器系统时响应的连续信号的产生曲线。 •3、峰底（peak base）：峰的起点与终点之间的距离 •4、峰宽（W ，peak width）：在峰两侧拐点处所作切线与峰底 相交两点的距离 •5、峰高（h ，peak height）：色谱峰最大值点到峰底的距离 •6、半峰宽（W h/2 ，peak withd at half height）：通过峰高的中点作 平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离 •7、峰面积（A ，peak area）：峰与峰底之间的面积。 •8、死时间（dead time）：不被固定相吸附或溶解的组分的保留时间，死 时间实际上就是流动相流经色谱柱所需要的时间，或者组分在流动相中所消 耗的时间。因此，也叫流动相保留时间。对于同一试样所有组分组死时间 都是相同的。 •9、保留时间（retention time） ：组分从进样到出峰最大之所需的时间 。 10、容量因子（capacity factor， k ）：化合物在两相间 达到分配平衡时，在固定相与流动相中的量之比。因此容量 因子也称质量分配系数。K＝ns/nm=t’ /t R M 物理意义：表示一个组分在固定相中停留的时间 （t‘ ）是不保留组分保留时间（t ）的几倍。k＝0时，化合 R 0 物全部存在于流动相中，在固定相中不保留，t’R ＝0； k 越大，说明固定相对此组分的容量越大，出柱慢，保留时间 越长。 分辨率R 分辨率表示色谱体系分离两种组份的能力 分辨率R 两相邻色谱峰的分离程度 R=1.0, 98%