重组人Ⅱ型胰蛋白酶性质及初步应用探究.docVIP

重组人Ⅱ型胰蛋白酶性质及初步应用探究摘　要：目的研究重组人Ⅱ型胰蛋白酶的性质及初步应用。方法用米氏方程和双倒数作图法确定米氏常数Km，Vmax值，BAEE法测定胰蛋白酶活性，将胰蛋白酶用于激活羧肽酶原B及细胞消化。结果重组人II型胰蛋白酶最适反应温度30℃，最适pH 7.6，以BAEE为底物，Km和Vmax分别为12.7μmol／和212.76μmol／min。EDTA~PMSF抑制酶活性，高于50℃条件下易失活。与牛胰蛋白酶相比，重组人胰蛋白酶对羧肽酶原B有更高的激活效率，细胞消化方面二者效果基本相同。结论温度及pH是影响酶稳定性的较大因素，重组人胰蛋白酶可替代牛胰蛋白酶用于激活羧肽酶原B和细胞消化。 关键词：重组人Ⅱ型胰蛋白酶；牛胰蛋白酶：性质；应用 中图分类号：Q55.9　文献标识码：A　文章编号：1672-979X(2010)11-0384-05 盐胰蛋白酶原为胰蛋白酶的前体，在胰脏合成。在Ca2+存在条件下，胰蛋白酶原可通过肠激酶或胰蛋白酶的自身激活，断开肽链N端6位赖氨酸和7位异亮氨酸残基之间的肽键，失去一段6肽，分子构象变为有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶可激活酶原，成为有活性的酶。商品化胰蛋白酶主要来源于猪或牛的胰腺。 人胰蛋白酶有I型和II型2种类型，根据等电点不同，又分为阳离子型和阴离子型。我们用基因工程方法得到了重组人阴离子型胰蛋白酶原(II