阳及平喘颗粒对豚鼠哮喘模型炎症介质及肺组织形态学变化实验探究.docVIP

阳及平喘颗粒对豚鼠哮喘模型炎症介质及肺组织形态学变化实验探究摘要：耳的：观察阳和平喘颗粒对实验性支气管哮喘时炎症及组织的影响，探讨其治疗哮喘的机理。方法：采用卵蛋白成功诱发豚鼠哮喘后用阳和平喘颗粒进行治疗，EuSA法检测豚鼠血浆中可溶性白介素一2受体(slL-2R)和白介素-6(IL-6)含量，放免法测定血浆中ET含量，并采用光镜和电镜法观察其对肺组织的影响。结果：模型组血浆中sIL-2R、lL-6和ET的含量与正常对照组比较明显增高(P的阳和平喘颗粒在本科多年临床观察，疗效较好。本实验用来治疗豚鼠哮喘模型，以进一步探讨阳和平喘颗粒拮抗哮喘的作用机制。 1 材料与方法 1.1　实验动物健康豚鼠120只，清洁级，雌雄各半，体重(250±50)g，由安徽医科大学动物实验中心提供。正常饲养7天后进行实验。 1.2　药物与试剂 阳和平喘颗粒由安徽中医学院第一附属医院制剂中心提供，桂龙咳喘宁胶囊由山西桂龙医药有限公司制造，10％卵蛋白(OVA，Sigma公司)，ET放免试剂盒由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供，IL-2RELISA试剂盒和IL-6 ELISA试剂盒购于美国R＆D公司，氢化可的松(2mL：10mg)安阳九州药业。 1.3　实验设计及造模方法将动物随机分为6组，每组20只，即正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁胶囊组、阳和平喘颗粒低剂量组、阳和平喘颗粒高剂量组。按照国际通用的方法，以经典的卵蛋白致敏和攻击加以复制，在实验的第1天，分别给哮喘模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁胶囊组、阳和平喘颗粒低剂量组、阳和平喘颗粒高剂量组的豚鼠腹腔注射10％OVA+生理盐水(NS)1mL以致敏，第15天将致敏豚鼠置于雾化箱中，以恒压400mmHg雾化吸入l％OVA+NSl5min，每2日1次，持续10天。同时复合复制肾阳虚模型，将氢化可的松配成100mg／100mL，同时在张洪春虚喘动物模型二次造模方法为基础进行适当改良，造肾阳虚模型于第14、16、18、19、22、26、28天分别按1.0、1.2、1.4、1.6、2.0、4.0、8.0mL／只进行腹腔注射。动物先后出现咳嗽、气急、静卧、少动、呼吸频率加快、便溏、毛发倒伏、舌色发青、趴在一起、畏冷等症状，并且有部分动物死亡，提示造模成功。正常对照组以等量生理盐水进行腹腔注射和雾化吸入。 1.4　给药方法实验第28天开始给药，地塞米松组分别以地塞米松(3.5mg／kg)、桂龙咳喘宁胶囊组以桂龙咳喘宁胶囊混悬液灌胃(1.05g／kg)，阳和平喘颗粒低剂量组给于阳和平喘颗粒混悬液灌胃(2.8 g／kg)，阳和平喘颗粒高剂量组给于阳和平喘颗粒混悬液灌胃(4.2g／kg)，各组每日1次，疗程为2周。正常对照组、哮喘模型组以等量生理盐水进行灌胃，实验前动物禁食12h。 1.5 观察指标及方法给药结束后，将豚鼠用10％的乌拉坦0.36mL／100g腹腔注射进行麻醉，腹主动脉取血至抗凝管中抗凝，在4℃、3000r／min离心10min，取上清液用于测slL-2R、IL-6和ET含量，其测定严格按说明书操作。另取右肺下叶约2mm×1mm放人戊二醛中固定后用于H-E染色和电镜观察。 1.6　统计学方法所有统计数据采用SPSSl2.0统计软件处理，数据用均数±标准差(x±s)表示，两组样本均数用t检验，P0.05表示组间的显著性差异。 2 结果 2.1 阳和平喘颗粒对哮喘豚鼠血浆slL-2RIL-6和ET-1的影响哮喘模型组血浆中的slL-2R、IL-6和ET含量与正常对照组比较明显增高(P0.01)，与模型组比较，阳和平喘颗粒高剂量组可明显降低血浆中El-1、slL-2R和IL-6的水平(P0.01，P0.05)，阳和平喘颗粒低剂量对血浆中ET-1、slL－2R也有明显降低作用(P0.05)，对IL-6水平虽有降低作用，但较模型组比较无明显差异，见表1。 2.2 肺组织病理结果①光镜下肺组织H-E染色病理检测：正常对照组支气管壁及其周围组织结构清晰，可见少量噬酸性粒细胞浸润，无充血、渗出的表现，肺泡形态未见明显异常(如图1-A)。而模型组较正常对照组相比呈明显的炎性改变，气道黏膜皱襞增多，上皮细胞脱落，支气管腔内及周围肺组织可见大量炎性细胞的浸润，肺泡隔增厚，局部肺泡扩张(如图1－B)。地塞米松组和桂龙咳喘宁胶囊组可明显减少炎症细胞浸润，并且可使肺泡壁增厚程度和组织病理损伤减轻(如图1－C和图1－D)。阳和平喘颗粒组两个剂量组均可使肺组织中炎症细胞浸润较模型组均减轻。腔内分泌物减少(如图l－E和图1－F)。 ②电镜下肺组织病理检测：与正常对照组(如图2一A)相比哮喘模型组嗜酸性细胞明显增多，Ⅱ型细胞板层小体排空现象较多；有部