第三章二级菌种和三级菌种的制备2013.03.28.ppt

5.严格遵守无菌操作规程。要耐心、细致，切忌碰擦粘带。 问题：器械不洗依靠熏，不擦酒精依靠熏，擦了酒精就不用火焰烧，碰擦污物不重烧等。 正确作法 接种的用具、容器，能洗的要洗干净，能熏的要熏蒸，能擦酒精的要擦酒精，能用酒精灯火焰烧的要用火焰烧。大量的三级种可两人接种，把好火焰封锁关，一人持料瓶，一人接种，不离火焰无菌区，配合默契，动作敏捷。 ◆不吃料现象 接入菌种瓶内的母种或原种，菌丝不萌发；有些菌种块上的菌丝虽萌发，但不向料内生长，以后逐渐萎缩变黄。 产生原因 1.培养料配方不合理，配制不科学。 2.培养料含水量、pH不适合，菌丝不吃料。 3.接种场所处理时，用药量过多或温度过高，致使菌丝受药害死亡。 4.灭菌以后，抢温接种温度过高，致使菌丝遇高温而死亡。 5.接种工具未冷却或菌丝块靠火焰太近，菌丝被烫死或烧死。 6.接入的母种或原种，在不条件下长期储藏，菌丝老化失去生长能力。 7.菌种瓶（袋）内潜入螨类，咬食菌种块，致使菌丝消失。 第四节 液体菌种生产和使用 液体菌种：在无菌条件下，将母种接种于合适的液体培养基中，给予适宜的条件，通过震荡、搅拌等方式培养出来的菌丝球称为液体菌种。 第四节 液体菌种生产和使用 一、液体菌种的优点 二、液体菌种培养液配方 三、液体菌种的培养 四、液体菌种的使用 一、液体菌种的优点 ●菌种生产周期短 ●接于固体料中发菌快 ●菌龄整齐一致 ●接种方便 二、液体菌种培养液配方 1.葡萄糖30％，豆饼粉2％，玉米粉1％，酵母粉0.5％，磷酸二氢钾0.1％，碳酸钙0.2％，硫酸镁0.05％，pH自然。适于多种食用菌的液体培养。 2.可溶性淀粉3～6％、蔗糖1％，磷酸二氢钾0.3％，硫酸镁0.15％，酵母膏0.1％，pH值调至6。适于平菇、香菇、猴头菇，以平菇最为适宜。可溶性淀盼可增加培养液粘度，菌丝球小而多，菌丝球分散性好。 3.马铃薯20％，葡萄糖2％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维生素B110毫克/升，琼脂0.05％，pH自然。适于培养香菇，菌丝生长快、菌球大、多，周围有绒毛，绒毛状菌普遍存在培养液中，有利于播种。 4.玉米粉4％，水解鱼粉2％，酵母膏0.1％，磷酸二氢钾0.15％，硫酸镁0.05％，pH自然。适于培养金针菇，猴头菌。 5.葡萄糖2.5％，酵母膏0.35％，玉米浆(含氮量7.1％)0.18％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，氯化钙0.006％，每升培养液内另加硫酸锌4毫克，硫酸锰5毫克，柠檬酸铁5毫克，维生素B10.1毫克。适于培养茯苓。 三、液体菌种的培养 液体菌种的培养：采用摇床生产的摇瓶培养法和采用发酵罐生产的深层培养法。 ●液体菌种的摇瓶培养 摇床室温在24～26℃，培养72～96h。培养结束时，因菌种不同，培养液出现不同色泽。平菇，金针菇的培养液呈浅黄色，香菇、猴头菌的培养液呈黄棕色，清澈透明，有许多菌丝小球，并有菇香。木耳的培养液呈褐色、粘稠，有香甜味。培养液混浊，多是细菌污染。培养液经显微镜检查后。方可用于生产。 摇床培养，只适于固体菌种的接种。液体菌种供发酵罐接种，或接种于三角瓶内，每瓶接种10mL，继续摇瓶培养。因菌球正处于旺盛生长状态，分散性好，能缩短培养时间，快者2d即可终止培养。摇瓶培养的液体菌种，在4℃冰箱中保存1—2个月，在15～20℃室温中保存7～10天，对接种成功率，产量均无不良影响。 摇瓶培养的液体菌种 ●液体菌种的深层发酵培养 食用菌菌丝体的深层发酵培养，不但要有种子罐、发酵罐、空气过滤器、空压机等专用设备，工艺比较复杂，对无菌操作有更严格的要求。只适于专业科研机构和大型食用菌工厂化生产。是近代食用菌工业生产的新途径，大有发展前途。深层发酵培养法。 四、液体菌种的使用 液体菌种可作二级种、三级种使用。在向二级种或三级种培养基上接种时，必须用接种器。接种器的制作方法是：取一支100mL兽用注射器，去掉针尖，换一根内径1～2㎜，长100～120㎜的不锈钢管，便制成一个接种器。使用前洗净并高压蒸气灭菌，冷却后抽取液体菌种即可进行接种。 待接二级种料瓶，去掉棉塞，改换无菌薄膜。接种时，将针管插入薄膜，每瓶接种量为10～15mL，使其均匀分布在培养基表面，用胶布贴封针孔，竖放在床架上培养。750g菌种瓶，一般在15d内可以长满瓶，比固体菌种接种长满瓶时间提前15～20d。 作三级种时，每瓶按种量为10～15mL，袋栽按每㎏干料1