着重探析交叉配血试验.pptVIP

交叉配血试验 实验内容 盐水介质交叉配血 聚凝胺法交叉配血 抗人球蛋白法交叉配血 解释配血不合的可能的原因 实验意义 在血型鉴定的基础上，通过交叉配血实验进一步证实受血者和供血者不存在血型不合的抗原抗体反应，保证受血者的输血安全。 主侧：受血者血清+献血者红细胞 次侧：献血者血清+受血者红细胞 自身：受血者血清+自身红细胞 室温盐水介质配血法 只检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。 实验步骤及结果判断 取洁净小试管两支，1支标明主侧管：受血者血清(PS)十供血者细胞(DC)，另1支标明次侧管：供血者血清(DS)+受血者细胞(PC)。 主侧管加入受血者血清2滴，再加供血者2～5%红细胞悬液l滴；次侧管加入供血者血清2滴，再加受血者2～5%红细胞悬液1滴。 混匀， 120g（1000转/分）离心1分钟或1300g（3400转/分）离心15秒。轻轻摇动试管，观察结果。 ABO同型配血，主侧管和次侧管均无凝集及溶血现象表示配血相合。 实验步骤 取试管两支，标记主次侧，主侧加受血者血清(浆)2滴，供血者2～5%红细胞悬液l滴；次侧加供血者血清(浆)2滴，受血者2～5%红细胞悬液l滴。 每管加低离子介质0.8ml，混匀，静置1分钟。 每管加聚凝胺1滴，混匀，1300×g（3400转/分），离心15秒。 倒出上清液，轻轻摇动试管，目测细胞有无凝集，如无凝集，必须重做。 再加入1滴假凝集清除液于管底，轻轻混合，观察结果。 结果判断 凝集若在1分钟内消失并呈均匀混悬液，应将反应物倒于玻片上借助显微镜观察，镜下无红细胞凝集为阴性，表示供受血者相容；1分钟内凝集不能被消除为阳性，表示供受血者不相容，配血不合。 实验步骤 取试管两支，分别标明主侧和次侧，主侧管加受血者血清2滴，供血者2～5%红细胞悬液l滴;次侧管加供血者血清2滴,受血者2～5%红细胞悬液1滴。对照管如下: 阳性对照：IgG抗D血清+2～5%RhD阳性红细胞悬液l滴 阴性对照：正常AB型血清+2～5%RhD阳性红细胞悬液l滴 盐水对照：供血者2～5%红细胞悬液l滴+等渗盐水1滴，受血者2～5%红细胞悬液1滴+等渗盐水l滴。 混匀，置37℃水浴45～60分钟（致敏），取出后用生理盐水洗涤红细胞3次，弃净上清液。 每管加抗人球蛋白试剂l滴，120g（1000转/分）离心1分钟或1300g（3400转/分）离心15秒，轻轻摇动，立即观察结果。 若肉眼没有观察到凝集现象，须将反应物倒于玻片上借助显微镜观察。 结果判定 阳性对照管应凝集，阴性对照管应不凝集。主侧、次侧管都不凝集和溶血，表示配血相合。任一侧发生凝集或溶血为配血不合。 交叉配血试验的注意事项 实验中若盐水介质法配血结果阴性（无凝集和溶血），而须再做聚凝胺法或抗人球蛋白试验时，可直接转入聚凝胺法第2步继续操作，或转入抗人球蛋白试验第2步。 室温较低时，应将试管保温，以防冷凝集素引起假阳性结果。 交叉配血试验中发现不配合时，首先应考虑受血者和供血者的ABO定型是否错误，必要时进行Rh血型鉴定及抗体筛检。其次应注意有无特异性同种抗体，或者病人的血清可在室温、37oC或抗人球蛋白试验中凝集所有的红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步做有关试验进行鉴定。 * * 检验医学院 输血医学教研室 实验原理 目前常规应用的血库配血方法为盐水介质加聚凝胺法或抗人球蛋白试验。 IgG抗体是一种免疫球蛋白单体，分子量小。在盐水介质中与红细胞相应抗原结合后，不能使红细胞出现肉眼可见的凝集现象，但在加入抗IgG的抗体（抗人球蛋白试剂）后，红细胞因其搭桥则可出现凝集现象。 实验原理