SNT 1449-2004 马流行性淋巴管炎检疫方法.pdfVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1449-2004 马流行性淋 巴管炎检疫方法 Quarantinemethodforepizooticlymphangitis 2004-06-01发布 2004-12-01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量监督检验检疫 总局 SN/T1449-2004 前 言 本标准的附录A和附录B均为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:卢晓中、王作佳、徐彪。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T1449-2004 马流行性淋 巴管炎检疫方法 范围 本标准规定了马流行性淋巴管炎的病原分离鉴定、酶联免疫吸附试验和皮内变态反应的检疫方法. 本标准适用于进出境马流行性淋巴管炎的检疫。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而.鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 病原分离鉴定 3.1 器具 棉拭子、平皿、外科剪、镊子、恒温箱、高压灭菌器、铂金耳、酒精灯、显微镜、超净工作台等。 3.2 培养基及试剂 3.2.1 动物脏器培养基:制备方法见附录A. 3.2.2 灭菌生理盐水、革兰氏染液、动物脏器培养基、4%葡萄糖肉汤、糖发酵管、明胶、蛋白陈水、靛基 质试剂、硫酸亚铁琼脂、缓冲葡萄糖蛋白陈水、生牛乳等。 3.2.3 实验用水见GB/T6682. 3.3 采样 采集被检动物软化的未破溃的皮肤结节、化脓灶或病变淋巴结，消毒处理后无菌操作采取脓汁于无 菌空试管或无菌平皿内，或直接无菌采取病变组织块于无菌平皿中。脓汁用灭菌生理盐水适当稀释后 作为被检材料，干病的痴皮须加适量的10%-30%氢氧化钾(氢氧化钠)液或生理盐水，使其充分溶解 后检查。 3.4 操作方法 3.4.1 显微镜检查 3.4.1.1 无染色压片标本镜检 3.4.1.1.1 用铂耳挑取处理过的病料于洁净的载玻片上，覆盖洁净的盖玻片。 3.4.1.1.2 在弱光下，先以显微镜(400倍~500倍)检查，然后再用油镜检查。脓汁中的流行性淋巴管 炎马伪皮疽组织胞浆菌呈双层膜卵圆形或梨子形，一端或两端尖锐，大小((3pm-4pm)X(2pm^- 3pm)，菌体内为半液状，并可见到一至数个能活泼运动的小颗粒。 3.4.1.2 染色标本检查 3.4,1.2.1 用棉拭子直接沽取被检动物化脓灶周边或病变淋巴结、病变结节组织渗出液涂抹载玻片。 3.4.1.2.2 自然干燥后火焰固定。 3.4.1.2.3 依照GB/T4789.28规定进行革兰氏染色。 3.4.1.2.4 镜检方法同 3.4.1.1.2, SN/T 1449-2004 标本背景为淡紫色，白细胞内外可以清楚地看到流行性淋巴管炎马伪皮疽组织胞浆菌，呈淡灰色， 菌体边缘呈紫色，小颗粒呈黑紫色或黑色。 3.4.2 分离培养 3.4.2.1 取制备好的动物脏器培养基(见附录A)试管五支，无菌操作将采集的样品用接种棒勾取绿豆 粒至黄豆粒大小的脓液，或切取结节(淋巴结组织)内壁小组织块，放置培养基斜面下三分之一处。 3.4.2.2 将接种好的试管置28℃恒温培养，若培养超过 10d，向试管内加灭菌生理盐水 加人量以不 超过培养物为宜。 3.4.2.3 经过4d-15d培养，在原接种部位上面出现乳白色至淡灰色小