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fish技术（鱼技术） FISH（荧光原位杂交）技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是：如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。 鱼技术：荧光标记的原位杂交技术1974年伊万斯首次将染色体显带技术和染色体原位杂交联合应用，提高了定位的准确性。20世纪70年代后期人们开始探讨荧光标记的原位杂交，即鱼技术。1981年哈珀成功地将单拷贝的DNA序列定位到G显带标本上，标志着染色体定位技术取得了重要进展。20世纪90年代，随着人类基因组计划的进行，由于绘制高分辨人类基因组图谱的需要，鱼技术得到了迅速的发展和广泛应用。1。原理将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析肺肿瘤细胞鱼。 2。实验流程鱼样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。3。特点原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高，可以通过延长曝光时间加强信号强度，故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等。采用荧光标记系统则可克服这些不足，技术这就是鱼。鱼技术作为非放射性检测体系，具有以下优点：1、荧光试剂和探针经济、安全；2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；4、鱼可定位长度在1kb的DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当；5、多色鱼通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列；6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。缺点：不能达到100%杂交，特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。4。应用该技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位，而且也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。 荧光原位杂交（鱼）技术的发展和进步 鱼技术显示核酸是在同位素标记探针的基础上改进而来的。早期的同位素标记没有专门的标记方法，如将随机同位素标记的碱基添加到生长的细胞中之后再进行放射自显影。同位素杂交的诸多缺点必然要求用更好的技术来取而代之。首先，放射性材料决定了探针的不稳定性，特别是半衰期较短的同位素随着时间推移不断衰退而造成探针的活性不能持久。其次，虽然放射显影的灵敏度极高，但是分辨率（清晰度）有限。第三，为了在放射显影底片上获得可检测到的信号往往需要延长曝光时间，使检测周期变长。第四，放射性标记探针相对比较昂贵，并且必须按照严格的程序转运、贮存、处理带有放射性的材料技术在分辨率、检测周期、安全性等方面明显得到了改进而鱼， And laid the foundation for future multi-point detection, high-quality analysis, living cell mapping, and so on. In 1980, Bauman first used fluorescence in situ hybridization for nucleic acid detection and directly labeled RNA-3 end with fluorescein as a probe for specific DNA sequences. The enzyme embedded in the whole probe combined with the fluorescein labeled base method has been widely used in the preparation of fluorescent probes. One color can be labeled at one time. Amino allyl labeled base technology can be combined with any hapten or fluorescein, which is crucial for the in situ hybridization technique, because the base amino allyl labeled only by a simple chemical reaction can obtain low background signal a series of probes, through the two level de