HIV抗体检测技术规程.ppt

HIV抗体检测实验室技术规程 天津市CDC HIV确证中心实验室 郑敏娜 2013.6.25 明确HIV感染者（诊断） 控制传播 及早医学干预 血液筛查 流行病学调查、高危人群监测 开展VCT的基础 职业保护 主要内容 HIV抗体检测的相关规范性文件 HIV抗体检测的方法和注意事项 HIV抗体确证实验的相关规程和结果解释 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 HIV抗体检测的相关规范性文件 《医疗机构临床实验室管理办法》卫医发〔2006〕73号 《全国艾滋病检测工作管理办法》卫疾控发〔2006〕218号 《全国艾滋病检测技术规范(2009年版)》 HIV抗体检测的相关规范性文件 《全国艾滋病检测工作管理办法》卫疾控发〔2006〕218号 检测工作要求第十二条　艾滋病检测实验室应在规定的职能范围内开展检测工作，遵守国家法律、法规和有关规范。检测技术及程序应符合《全国艾滋病检测技术规范》的要求。 HIV抗体检测的方法和注意事项 HIV抗体检测的主要方法——金标准 包括初筛实验和确证实验 HIV抗体检测的方法和注意事项 初筛实验: 试剂必须经国家食品药品监督管理局注册批准，在有效期内的，批批检合格 敏感性和特异性好： 方法包括：ELISA，化学发光法和快速检测法（免疫层析，颗粒凝集等方法） 样本：血清、血浆；干血斑；唾液；尿液 试验操作注意事项 严格遵照试剂说明书进行试验检测 正确使用仪器设备 正确判读试验结果 作好实验记录 HIV抗体检测技术要求 建立标准操作程序 禁止肉眼判读！ 保证酶标仪，洗板机正常运转 保证加样器准确 选择高质量的与加样器配套的TIP头 使用有效期内的试剂 保证样品质量 影响ELISA测定的因素 试剂盒的因素：妥善保存试剂 在有效期内使用 试验操作 形成良好的操作习惯：加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 严格按试剂说明书操作:空白孔不加样品和酶标试剂 操作过程中集中精力：避免加样错误 注意事项 保证实验室温度，室温过低有可能造成吸光度值偏低。 ELISA试验的敏感性很高，如果操作不当很容易出现非特异性反应。在操作过程中，尤其应注意洗涤过程。洗涤彻底可减少假阳性的机会。 进行ELISA试验时，必须用酶标仪进行测定，不得目测结果。使用酶标仪时，要避免酶标孔内产生气泡，影响判读结果。 ELISA操作中的注意事项 试剂准备 加样 温育 洗板 显色 比色 ELISA试验假阳性产生原因？ 样品加错位置，标本搞错 洗板机设置不当，洗板时洗涤液溢出，污染其它孔 洗板机内部管道有真菌生长 实验中，实际孵育时间过长，温度过高 待测标本溶血或含有血细胞。 待测标本长菌或其它原因混浊。 其它原因：〔与试验操作无关〕． HIV感染产妇所生婴幼儿的抗体检测 HIV抗体确证实验的相关规程和结果解释 复检阳性或一阴一阳的样本 确认实验 HIV抗体确认实验 包括： 免疫印迹实验(WB) 条带免疫试验(LIA) 免疫荧光试验(IFA) 放射免疫沉淀试验(RIPA) HIV抗体确认实验结果 HIV抗体确证实验的流程 HIV抗体检测的样本保存 用于抗体和抗原检测的血清和血浆样本： 1周内 2-8℃保存 1周 -20 ℃保存 筛查阳性样本：送确证 筛查阴性样本：根据具体情况，至少1-2个月 确证样品：保存10年以上 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 实验室布局不合理，没有严格分区；没有标识 应设严格分区（污染区、半污染区和洁净区）；生物安全标识 个别实验室设备不全，没有安全柜 仪器没有定期校准 酶标仪/洗板机、加样器，温度计，高压灭菌器，生物安全柜每年校准，每季度期间核查 没有HIV实验室生物安全管理制度和SOP 实验活动的基本依据，必须建立，每年应进行检查修订，并有记录 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 没有质控记录：很多实验室都有 人员流动性大，经培训的专业技术人员严重不足，部分人员未经专业技术培训就上岗 保证实验室负责人和主要技术 人员的稳定，两年一培训，考核合格，持证上岗 实验室技术人员生物安全意识淡薄 增强安全意识，做好防护，保护自身安全 实验室原始记录不规范，缺乏可溯源性 应体现加样步骤和位置；试剂厂家、批号、效期，检测人和复核人 目前我市HIV筛查实验室中存在的问题 复检阳性结果的报告问题 筛查实验阴性直接