南定病毒标准血清制备及间接ELISA检测方法的建立.pdfVIP

1144 实用预防医学 2016 年9 月第23 卷第9 期 Pract Prev Med , Sep. 2016 , Vol. 23 , No.9 ·方法研究· 南定病毒标准血清制备及间接 ELISA 检测方法的建立 王德、全l ，刘渠2 ，周健明2 ，梁克峰1 ，刘晓娜1 ，未礼平1 ，王精颖l 1.广东药学院公共卫生学院，广东 广州 510310: 2. 深圳市龙岗区疾病预防控制中心 摘要: 目的 制备南定病毒(NDiV) 标准血清，建立 ELlSA 检测方法，为在人群中监测南定病毒感染状况提供方法。 方法 用南定病毒感染3 周龄SPF 级 BALB/c 小鼠，分别在0 、 7 、 14 d 以腹腔注射的方式免疫SPF 级6-8 周龄 BALB/c 小 鼠，免疫血清用 IFA 法进行鉴定;南定病毒感染 C6/36 细胞，制备 ELlSA 抗原，确定酶结合物、抗原和标准阳性血清的最佳 工作浓度，建立南定病毒 ELISA 检测方法，进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验。 结果 制备南定病毒免疫血清， 以 IFA 测定血清效价为 1 :320 ，与呼吸道合胞病毒、腺病毒均无交叉反应;建立了 ELlSA 检测方法，确立了各种试剂的最佳 工作浓度，其中酶结合物最佳工作浓度为 1: 10 ∞0 ，抗原为 2.3μ吕Iml ， 阳性参考血清为 1 :200 ; ELISA 检测灵敏度为 1 : 32∞。板内特异抗原、正常抗原平均变异系数为4.561毛和 5.17% ，板间为 3. 383毛和 6.643毛。稳定性实验相对偏差均小于 20%。 结论 本研究制备的南定病毒免疫血清可作为血清学检测方法中的标准质控血清;建立的 ELISA 方法重复性、 稳定性好，敏感性和特异性强，可用于南定病毒血清抗体检测。 关键词: 南定病毒(NDiV) ;小鼠接种; ELISA 方法 中图分类号:R-33 文献标识码:B 文章编号:1 伽-31 1O( 2016)09-1144-04 DOI: 1O.3969/j.issn.1伽-31 1O.2016.09.ü39 Preparation of standard serum and establishment of indirect ELISA detection method of NDiV antibody WANG De-quan , LIU Qu , ZHOU Jian-ming , LIANG Ke-feng , LIU Xiao-na , ZHU Li-ping , WANG Jing-ying • Shool ()f PlLblù: Health , Gnangdong Pharmacentical Univers时， Gnangzhon , Gltangdong 510310 , China Abstract: Objective To prepare the standard serum against NDiV and establish a method of detecting NDiV antibody by ELISA so as to monitor the infection status of NDiV in population. Methods NDiV was cultivated by intracerebral inoculation in BALB/c mice aged 3 months , and immunogen was prepared. 6-8 weeks old BALB/c mice were immunized on days 0 , 7 and 14 respectively by in