第2章 培养基灭菌.ppt

第二章 培养基灭菌 工业中规模化培养基础 培养基（Medium）是供微生物、植物和动物的细胞或组织生长和维持所用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。 培养基的配制 培养基的灭菌 指杀灭培养基中有生活能力的细菌营养体及其孢子，或除去培养基中的细菌营养体及其孢子。 对于液体培养基的灭菌，工程上所要解决的 课题是： 将培养基中的杂菌总数（N0）杀灭到可以接受的总数（N），需要多高的温度、多长的时间最为合理？ 这取决于杂菌孢子的热死灭动力学、反应器的形式和操作方法，还取决于培养基中有效成分受热破坏的可接受范围。 分批灭菌（实消）是将配制好的培养基放入发酵罐或其他装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行灭菌的操作过程，也称实罐灭菌。 优点：不需要专门的灭菌设备，投资少，设备简单，灭菌效果可靠 缺点：发酵罐占用时间长，培养基的营养成分破坏程度较大 一、微生物的热死灭动力学 每一种微生物都有一定的生长温度范围。 当微生物处于最低温度以下时，代谢作用几乎停滞且处于休眠状态。相反温度超过最高限度时，细胞中的原生质胶体和酶蛋白就几乎发生不可逆的凝固变性，使微生物在很短的时间内死亡。 一、微生物的热死灭动力学 微生物的热阻（对热抵抗力）：微生物在某一特定条件（一定温度、加热方式）的死亡时间。 致死温度：杀灭微生物的极限温度 致死时间：在致死温度下杀灭全部微生物所需的时间。 1. 热死灭动力学方程 在一定温度下，微生物的受热死亡符合单分子反应动力学即微生物的热死亡速率与任一瞬间残存的活菌数成比例。 其中：N——任一时刻的活细菌浓度，个/L t ——时间，min K——比热死速率常数，min-1。K是判断微 生物受热死亡难易程度的基本依据，其大小 与微生物的种类和加热温度有关。 dN/dt ——菌的瞬时变化率，即死亡速率 将方程积分后得： 营养细胞易于受热死灭，其比热死速率常数K值很高，相对热阻低；细菌孢子的K值相对很低，相对热阻高。 因此对培养基进行灭菌，应该以细菌孢子为杀灭对象。 2. T对K的影响 A——频率因子，7.94×1038，min-1 △E——活化能，J/mol R——通用气体常数，8.28J/(mol?K) 培养基灭菌，既要杀死杂菌的孢子，又要保存其中的有效成分。 试验表明，细菌孢子的热死灭反应的ΔE很高，而待灭菌培养基中某些有效成分的热破坏反应的ΔE较低。因而迅速将T提高到较高的灭菌温度，可以加快细菌孢子的死灭速度，缩短高温下的灭菌时间。 虽然在较高的温度下灭菌，能加大对培养基有效成分的破坏，但由于灭菌时间的显著缩短，结果是有效成分的破坏反而大为减少。 灭菌动力学所得出的重要结论： 高温短时间灭菌，既能迅速灭菌，又能有效地保存培养基中的一些有效成分。 分批灭菌的设计 连续灭菌（连消）是将配制好的并经预热（60～75℃）的培养基用泵连续输入由直接蒸汽加热的加热塔，使其在短时间内达到灭菌温度（126～132℃）。然后进入维持罐（或维持管），使在灭菌温度下维持5～7分钟后再进入冷却管，使其冷却至接种温度并直接进入已事先灭菌（空罐灭菌）过的发酵罐内。其过程均包括加热、维持和冷却等灭菌操作过程。 培养基的冷却方式有喷淋冷却式、真空冷却式、薄板换热器式几种方式。 优点：连续性强，快速灭菌消毒，培养基营养成分破坏少，适用于大容积发酵罐物料的连续灭菌消毒。加热时间短，提高了热的利用率；操作条件恒定，灭菌质量稳定；易于实现管道化和自控操作；发酵设备利用率高。 缺点：对设备的要求高，需另外设置加热、冷却装置；操作较麻烦；染菌的机会较多，染菌涉及面广；不适合于含大量固体物料的灭菌；对蒸汽的要求高。 一、连续灭菌器的流体流动模型 V 反应器中液体所占的体积（L，m3） Q 通过反应器的流体流速（L/min，m3/min） 培养基在连续灭菌器中流动时间： 滞流， v = 0.82vmax 湍流, v = 0.5 vmax 活塞流（理想） 在设计连续灭菌设备时，必须认识到并不是培养基的每一质点都在反应器中停留同样的时间。 实际的反应器中，与流动方向相垂直的截面上各质点的流速不同，这就必然造成物料间的（轴向）混合，这样就不能保证物料先进的先出，后进的后出；有的物料灭菌时间长，有的灭菌时间短。在设计反应器时，一定考虑到这个现象。 返混现象 ： 反应器中停留时间不同的