第十一章 紫外-可见分光光度法.ppt

END 祝全体同学顺利通过《无机及分析化学》期末考试 预祝大家新年快乐！ 在2014年 取得长足的进步！ * 当c的单位为g·L-1，b的单位为cm时，比例常数K用a表示，其单位为L·g-1·cm-1，a称为吸光系数，这时上式变为： A = abc （11-3） 当c的单位用mol·L-1，b用cm时，比例常数K用ε表示，其单位为L·mol-1·cm-1，ε称为摩尔吸光系数，此时上式变为： A = εbc （11-4） 摩尔吸光系数ε可看成是待测物质浓度c为1mol·L-1，液层厚度为1cm时，在特定波长下所具有的吸光度。ε值越大，表示有色物质对该波长光的吸收能力越强，有色物质的颜色越深，测定的灵敏度也就越高。 应用朗伯－比耳定律时，必须掌握好以下条件： ①入射光波长应为λmax?，且单色性好； ②被测溶液具有均匀性、非散射性(不浑浊， 也不呈胶体)； ③被测物质的浓度应在一定范围内?。 朗伯－比耳定律不仅适用于可见光，也适用于红外光和紫外光；不仅适用于均匀非散射的液体，也适用于固体和气体。因此，它是各类吸光光度法定量的依据，用途很广。 吸光度测量的条件选择： 1）测量波长的选择：λmax 2）吸光度读数范围的选择： 3）参比溶液(空白溶液)的选择： 选A = 0.2~0.8 注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和 界面反射等因素对透光率的干扰 三、偏离BEER定律的因素 依据Beer定律，A与C关系应为 经过原点的直线 偏离Beer定律的主要因素表现为 以下两个方面 （一）光学因素 （二）化学因素 非单色光的影响： Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度 （二）化学因素 Beer定律适用的另一个前提：稀溶液 浓度过高会使C与A关系偏离定律 11-3 光度分析法及其仪器 分光光度法及分光光度计 1.基本原理 光度法的基本原理是：由光源发出白光，采用分光装置，获得单色光，让单色光通过有色溶液，透过光的强度通过检测器进行测量，从而求出被测物质含量。 2. 分光光度计的主要部件 ①光源 ②单色器 ③吸收池 ④检测器 ⑤显示系统 ① 光源功能：提供能量激发被测物质分子，使之产生电子光谱谱带（提供宽带辐射）。 ② 单色器 功能：从光源辐射的复合光中分出单色光。 ③ 吸收池 功能：盛放分析试样（一般是液体）。 ④ 检测器 功能：检测光信号，测量单色光透过溶液 后光强度变化的一种装置。 ⑤ 信号显示系统 3.分光光度计 分光光度计的类型按其设计原理可以分为单波长分光光度计和双波长分光光度计两类。 1．光源： 2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 棱镜——对不同波长的光折射率不同 色散元件 分出光波长不等距 光栅——衍射和干涉 分出光波长等距 钨灯或卤钨灯——可见光源 350~1000nm 氢灯或氘灯——紫外光源 200~360nm 3．吸收池： 玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英——不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致） 4．检测器：将光信号转变为电信号的装置 5．记录装置：讯号处理和显示系统 光电池 光电管 光电倍增管 二极管阵列检测器 类型： 1．单光束分光光度计： 特点： 使用时来回拉动吸收池 →移动误差 对光源要求高 比色池配对 2．双光束分光光度计： 特点： 不用拉动吸收池，可以减小移动误差 对光源要求不高 可以自动扫描吸收光谱 3．双波长分光光度计 特点： 利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差 吸光光度仪器的一般操作程序 1.选定合适的波长作为入射光，接通电源预热仪器。 2.调透光率为零，即仪器零点。 3.将参比溶液置于光路，接通光路(盖上吸收池暗箱盖)，调T%=100.0。2、3步应反复调整。 4.将样品溶液推入光路，读取吸光度A。 5.测定完成后，应整理好仪器，尤其要注意吸收池应及时清洗干净。 11-4 吸光光度法测量条件的选择 为了使测定结果有较高的灵敏度和准确度，必须注意选择最适宜的测量条件。 ① 入射光波长 ② 吸