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动物学杂志 ChineseJoarnaLoiZoolog7 一 种观察贝类染色体的制片法 孙 振 兴 (山东省水产学校，烟台 2640O0) 摘要 将贝类的担轮幼虫或成贝鳃组织经秋水仙素处理、KCI 渗作用 、卡诺氏液固定后得到前 细胞悬浊液滴片，经 35—40℃ 电热干燥，最后用吉母萨染料染色 ，即可得到清晰的染色体标本。 观察贝类染色体 ，确定染色体的数 目及其 胞呈均匀悬浊状。 姐型 ，对研究贝类的细胞遗传学、遗传育种学都 5．电热干燥 将载玻片放在 35—4O℃ 的 是不可缺少 的重要环节。用低渗处理 、空气干 平板式恒温 电热器上使其微热 ，再把一滴细胞 燥法制作鱼类染色体标本 ，国内外已有若干报 悬浊液滴到经预热的载玻片上 ，使其均匀扩散 道 ．6]。但贝类方面 ，国内已发表的有关贝类染 井干燥。 色体的研究 ，均是用卵或早期胚胎以压片法观 6．染色 用 20％ 的吉 母 萨 (giemsa)染 察染色体 。 本文采用一种利用担轮幼虫 或 料 (vH调至 64)染色 20分钟 ，水洗 晾干之后 成 贝鳃组织 、经处理后用 电热干燥法制作 贝类 即可用于观察计数。 染色体标本 的方法 ，现介绍如下 。 (=) 用成贝的鳃组织制片 将秋水 仙 素 (一)用孵化 的担轮幼虫制片 按 5~,g／g(成贝体重)的剂量 ，用 0．5m1人工 1．秋水仙素 (colchicine)处理 将从培养 海水溶解后，注射到成贝肌内内。将成贝放入 容器中取样采集到的孵化担轮幼虫，与海水一 水槽中静置 l0一 l5小时 ，然后剪下其鳃组织 ， 起装入 l0—2Oml的采样瓶中，滴入秋水仙 素 用 0．1％的胰且 白酶 (trypsin)处理 l0分 钟 ， 搀水溶液并调至最终浓度为 0．I％，然后静置约 再用 0．075mol／L KC1液低渗处理 4060分 2小 时。 钟 ，最后用卡诺氏液充分固定。 2．低渗处理 幼虫沉淀后弃去上清液 ，加 制片时，将经固定的鳃组织和几滴 50％ 的 入数 ml0．075mol／L的 KC1液 (1ml幼 虫 加 醋酸液共置于表面皿 内，用手术刀片将其轻轻 9m1KC1)；待幼虫完全沉淀后 ，弃去上清液 ， 捣碎使细胞呈悬社状，再滴到经预热的载玻片 再次更换数 ml新的 0．075mol／L KCI液 ，然后 上 ，干燥后用吉母萨液染色 即成o 静置约 1小时。 (三)讨论 秋水仙素浓度过低 ，难 以获得 3．固定 弃去 KCI上清液 ，先加入数 ml 较多的中期分裂相 ；秋水仙素浓度过高 ，会引起 卡诺氏 (carnoy)液 (纯酒精：醋酸 一3：1)予 染色体的收缩。我们曾试用过浓度 为 0．05％和 固定 l5分钟后，再换 以新的卡诺氏液 ，放 入 02％ 的秋水仙素 ，但从制片效果看 ，仍 以0．1％ 一 18C低温冰箱中充分固定两小时以上，即可 的浓度为宜。 使 用。 低渗处理是使细胞膨胀 ，染色体分散 ，减少 4．制备细胞悬浊液 将卡诺氏液固定的样 或避免染色体在细胞 内的重叠现象，便于观察 品滴入试管 中，弃去上清玻 ，然后加一滴 5O％ 计数。低渗液除用 KCI外 ，还可用 25％ 的稀 的醋酸 ，用吸管在试管中缓慢搅动，使幼虫的细 释海水 ，但后者细胞膨胀程度差 ，染色体重叠现