阐明促凋亡蛋白Bim由SP1转录调控的新机制-西南医科大学科技处.PPT

国家基金申请存在的问题和对策 黎 明 涛 中山大学中山医学院 中山大学蛋白质组学中心 申请书需回答的问题 为什么 立项依据 做什么 研究目标、研究内容 怎么做 研究方案、技术路线 能否做 可行性：工作基础、工作条件 标 题 一个好的标题等于成功一半 确切、醒目、新颖、主题明了 围绕“科学问题” 大小适中，防止“大题目、小课题” 与“科学问题”和“研究目标”呼应 神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控 细胞凋亡 时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控 神经元凋亡时 BH3-only蛋白Bim的转录调控 神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的 调控 SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控 SP1对神经元凋亡的调控作用 关键词：SP1/Bim /基因调控/信号转导/神经元凋亡 摘 要 1. 工作基础 继续和深入 发表和未发表 创新 2. 科学问题 重要！不能缺！中肯 3. 预实验 针对“问题”的预实验结果 4. 工作假设 思想性、创新性 5. 主要方法 可靠性第一 先进性第二 6. 研究目标 明确、具体 7. 研究意义 理论性和应用性 神经元凋亡时SP1对BH3-only蛋白Bim的转录调控 我们已经证明了撤钾诱导神经元凋亡时JNK/c-Jun 和PI3K/Akt/FKHRL1信号通路不参与BH3－only蛋白Bim的上调。 那么，Bim上调的转录机制是什么？启动子5‘末端序列续减分析确立了诱导Bim表达的启动子核心区，进而发现一个典型的转录因子SP1结合序列位于其中。进一步实验显示：神经元凋亡时SP1被激活；负显性SP1和SP1-DNA结合抑制剂mithramycin A抑制了Bim上调和神经元凋亡。由此，我们首次提出了Bim 上调的新机制，即：神经元凋亡时转录因子SP1被激活，激活的SP1直接调控Bim的诱导表达。本项目拟进一步采用腺病毒表达技术以及启动子定点突变、EMSA和CHIP方法，旨在获得SP1直接调控Bim基因的可靠证据。本项目将阐明SP1对促凋亡蛋白Bim的调控作用和机制、为确立SP1作为神经退行性疾病治疗的新靶点提供更充分的科学依据。 CaMKII磷酸化GSK-3对去极化介导的神经元存活的调控 GSK-3α/GSK-3β是促神经元凋亡的重要激酶。研究表明去极化可使GSK-3α Ser21/GSK-3β Ser9发生磷酸化并抑制其活性，从而保护性干预凋亡的发生。但是，去极化时，究竟哪一个激酶介导了GSK-3磷酸化尚不清楚。排除了AKT、PKA、p90RSK的参与后，通过底物一致序列分析和抑制剂实验，我们提出CaMKII介导GSK-3磷酸化的可能性。进一步的体外重组激酶反应分析证明，CaMKII可直接磷酸化GSK-3α Ser21/GSK-3β Ser9。本项目拟采用共免疫沉淀、siRNA和激光共聚焦等方法，旨在获得CaMKII与GSK-3直接相互作用的可靠证据，评价和证实CaMKII磷酸化GSK-3这一事件在去极化促神经元存活效应中的作用。本项目有望揭示去极化调控GSK-3的新机制，为确立GSK-3作为神经退行性疾病治疗的新靶点提供更充分的科学依据。 立项依据 1. 值得做吗？必要性：意义 价值 思想 创新 2. 谁来做呢？舍我其谁 3. 科学问题？中肯 明确 4. 突出自己的工作 预实验 图文规范化 5. 文献 档次 时效性 自己的文章 规范化 6. 主线清楚 深入浅出 通俗易懂 参 考 文 献 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu,Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li. Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：7-12. 2. Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, W