O139群霍乱弧菌.PPT

* * 2 血清分型和试管凝集试验 （1）血清分型 ①O1群霍乱弧菌的血清分型具有流行病学意义。 ②O1群分为小川、稻叶和彦岛型，O139群不分型。 （2）试管凝集 对流行首批病例菌株和进一步鉴定的特殊菌株（凝集不好，两型单价血清均良好凝集），进一步试管凝集。 * 3 形态学和生化学检查： ①??革兰氏染色检查为Gˉ菌。 ②?普通半固体穿刺，37℃18—20小时，O1与O139均沿线扩散生长，培养基混浊。 ③ O1与O139群菌株氧化酶、粘丝和靛基质试验均阳性。 * 4.鉴别诊断： 1.细菌性食物中毒：其特点为：有不洁食物史，同餐者往往集体发病。常有先吐后泻，排便前可有剧烈腹痛。粪便呈黄水样，较臭，偶有粘液或脓血便。可有发热及中毒症状，但循环衰竭少见。 2.急性细菌性痢疾 临床上常见有发热，大便为粘液、脓血便，量少，有腹痛及里急后重。大便镜检有大量脓细胞，培养可获痢疾杆菌。 * 4.鉴别诊断： 3.大肠杆菌性肠炎 主要与产肠毒素性大肠杆菌或致病性大肠杆菌引起的肠炎相鉴别。本症常有发热，恶心呕吐，剧烈腹部绞痛。大便每日l0数次，黄水或清水样便。严重者亦可出现脱水，婴幼儿患者可因此而危及生命。 * 5 O1群古典与El—Tor型鉴别 El—Tor弧菌已转为不溶血，溶血试验不能区别两生物型，主要靠第Ⅳ组霍乱噬菌体常规稀释液（106/ml）裂解来鉴别。同时辅以多粘菌素B、鸡血球凝集、V—P和溶血试验以供参考。 * O1群霍乱弧菌两个生物型鉴别 鉴别试验 O1 群 霍 乱 弧 菌 古典型 埃尔托 1 第Ⅳ组霍乱噬菌体（106/ml） + -（+） 2 多粘菌素B敏感试验 + -（+） 3 鸡血球凝集试验 -（+） +（-） 4 V—P试验 - +（-） 5 溶血试验 - + - * （1） 第Ⅳ组霍乱噬菌体裂解试验：常规稀释液106/ml），只裂解古典型，而不裂解埃尔托型，其原液（109/ml）对古典、埃尔托两型均裂解。对古典型裂解为增殖性裂解，对埃尔托为外因裂解（致死）。本试验与噬菌体—生物型同一平皿进行。 * （2）多粘菌素B敏感试验： A 将1.5%普通琼脂熔化冷却至50℃左右，按每毫升培养基加入50单位多粘菌素B倾注平板备用。 B 平皿背后划若干方格，被检菌2—3小时培养物用接种环接种琼脂表面格内，9cm平皿可接16—20个菌株。 C 37℃培养过夜观察，古典型不生长、生长不足（敏感）10个菌落，El—Tor和O139不敏感，长出菌苔。 D 本试验可用多粘菌素B纸片（50单位）按药敏常规法进行。 * * （3）鸡血球凝集试验 A 平皿内划出方格，每格1滴生理盐水，取被检菌18小时琼脂培养物少许在生理盐水中制浓菌液。 B 用接种环各加1滴经3次洗涤的2.5%鸡血球生理盐水悬液，肉眼观察结果，1分钟内出现凝集为阳性，El—Tor为阳性，古典型为阴性。 * * （4） V—P 试验： A 被检菌接种于葡萄糖磷酸盐胨水37℃培养2-3天。 B 取1ml培养物加5% α—萘酚乙醇溶液0.6ml，振荡5分钟加入40%KOH0.2ml,再振5分钟，去棉塞放室温。 C 一般2—5分钟出现浅红色，以1h内出现红色为阳性，古典型为阴性，埃尔托和O139为阳性 。 * 6埃尔托弧菌噬菌体—生物分型 为区分埃尔托型的（流行株与非流行株）两类菌株，作为追溯传染源，传播途径和分析流行形式的工具。 * (1) 噬菌体分型 A 根据国内5株噬菌体（VP1—VP5）将El—Tor弧菌分成32个噬菌体型，其中1型为常见流行株，2型为1型的粗糙型，3—6型也属流行株 B 方法 a