HIV-1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染血管内皮祖细胞的实验探究.pdf

㈣ 57 染血管内皮祖细胞的可行性和方法。方法：采用密度梯度离心法和贴壁细 胞分离法相结合，分离和筛选出人脐带血内皮祖细胞，用EGM．2培养基培 养、扩增，采用细胞免疫荧光染色和流式细胞仪检测内皮祖细胞表面标记 法检测不同病毒滴度时细胞增殖情况，计算转染率；取1：50转染组与未转 染的空白组进行对照，于转染后1．10天观察两组细胞增殖情况。用t检验、 卡方检验、方差分析等方法对实验结果进行统计学分析，尺O．05有统计学 33、 意义。结果：单个核细胞经EGM．2培养基培养一周后，即分化成CDl 对照，显示两组细胞生长曲线无明显差异pO．05)。1：100比率转染后， 细胞的增殖处于停滞状态，镜下可见细胞坏死形成碎片。结论：l、采用密 国家自然基金项目(项目号 l 度梯度离心法和贴壁细胞分离法相结合，经EGM．2培养基培养扩增可从脐 导绿色荧光蛋白基因转染标记血管内皮祖细胞是可行的；以MOI=1：50进 行转染，对细胞生长影响小，转染效率高。 关键词：血管内皮祖细胞；转染；慢病毒；绿色荧光蛋白 The Of nuOrescent transf．ectionin studygreen proteingene CeUsmediatedlentiVirusVectOr prOgenitOr by the and Abstract：objectiVe：Tbstudy identificationofendothelial understandthe progenitorcell(EPCs)．Tb feasibility andmethodsof jfluorescent inendothelial green protein(GFP)transfection cellsmediatedHIV-1lentiVims progenitorby by cellshan，ested劬mumbilicalcordbloodwereis01ated progenitor bygradient andCultllredinEGM-2medium．Thecellswereidentified densitycentrimgation CD13 VEGFR-2immunofluorescenceDifferent by 3， CD34， staining． oflentiViral infectionMOI：1：1 concentrationsvector(multiplic埘ofO，1：50， 1：1 usedtotransfectfluorescent EPCs．The OO)were green protein(GFP)into cell was di行erentViraltitersinMTT．The of tra